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临床检验免疫学-思考题答案 抗原抗体反应 一、抗原抗体反应的原理 1.）Ag、Ab能特异性结合：（内因） Ag、Ab能特异性结合，是由于Ag表位(抗原决定簇)和Ab Fab段（V区）之间的特异性结合，二者在空间结构上是严格互补的。 ）Ag、Ab结合的动力：（外因） 静电引力（又称库仑引力）：它是指抗原和抗体分子上带有相反电荷-NH3+或-COOˉ之间的相互吸引力。 例如Ab分子上赖氨酸离解层中含有-NH3+，Ag分子上天门冬氨酸离后含有-COOˉ，这两者之间就可相互吸引而产生静电引力。 该力的大小与两个电荷间距离的平方成反比。距离越近，静电引力就越强。 范得华力（又称电子云力）：该力是原子与原子、分子与分子间所具有的一种吸引力。当Ag、Ab两分子外层轨道上的电子相互作用时，电子云由于偶极摆动而产生吸引力，从而促使Ag、Ab的结合。 该力大小小于静电引力。 氢键：该力是由于分子中的H原子和电负性较大的O、N、S原子间的相互吸引而形成的。 氢键对于维持生物大分子（AgAb）的形态和结构有很大作用。它的大小大于范得华力。 疏水作用力： Ab是蛋白质，Ag少数是多糖，多数也是蛋白质，那么它们就是胶体物质，在水溶液中就带有-NH3+或-COOˉ极性基团，从而带上正电或负电 ，成为亲水胶体。 当Ag表位和Ab Fab段相互靠近时，亲水层消失，排斥掉两者间的H2O分子，促进Ag、Ab的结合。 疏水作用力在整个Ag、Ab反应中提供的作用最大 二、抗原抗体反应的特点 1）.特异性： Ag、Ab的结合实质上是抗原表位和抗体可变区之间的结合。Ab 可变区可形成一个平穴槽，Ag则楔状嵌入，由于两者在化学结构和空间结构上的互补，使得它们的结合具有特异性。 这种结合如同钥匙与锁的关系，一把钥匙只能开相应的一把锁. .最适比例：Ag、Ab的结合并不是在任何比例下都进行得充分、完全的。要形成我们肉眼可见的反应（如沉淀、凝集现象等），就涉及到最适比例问题。 .可逆性： Ag、Ab结合形成抗原抗体复合物，这一过程是一个动态平衡，在一定的条件下，反应是可逆的：Ag＋Ab →AgAb，其主要原因为Ag、Ab结合是非共价键结合，不为化学反应。 三、影响抗原抗体反应的主要因素 自身因素： 1） Ag：与Ag的理化性质、抗原表位的数目及种类有关； 2）Ab：与Ab的来源有关：是R 型抗体或H 型抗体； 与Ab的特异性、亲合性有关； 与Ab的浓度有关。 外界环境条件： 1）．电解质：一般实验室所用电解质都是生理盐水（0.9% NaCl）,浓度不能过高。浓度过高，会使Ab蛋白质优先沉淀而出现盐析现象。 2）．PH：一般为PH 6-8,当PH3时，可出现颗粒性的非特异性凝集，称酸凝集。当PH过高，可碱变性。 3）．温度：抗原抗体反应的常用温度为37°C。 四、抗原抗体反应分哪些种类？ 沉淀反应；凝集反应；补体参与的溶血反应、补体结合试验；中和试验；免疫标记技术。 五、什么是交叉反应，有无特异性，为什么？在临床上有何意义？ 交叉反应(cross-reaction)----抗体对具有相同或相似抗原表位的不同抗原的反应称为交叉反应。 有特异性。（交叉反应并没有违背Ag、Ab特异性结合的原则，其产生的先决条件是存在共同Ag表位。） 交叉反应的意义： 免疫学诊断：（利用交叉反应）eg 外斐氏反应等:用变形杆菌OX19、OX2、OXk作抗原查血清抗体，诊断斑疹伤寒（立克次氏体感染所致） 可造成免疫病理损害：eg 链球菌感染后易导致肾小球肾炎，其原因为链球菌与人体肾小球基底膜有共同Ag表位所致。 沉淀反应、免疫电泳 一、双扩、单扩、对流免疫电泳、免疫电泳实验的原理，方法，用途。 双扩 单扩 对流免疫 免疫电泳 原理 可溶性抗原与相应抗体在电解质存在下，在琼脂基质中扩散，当两者相遇，比例恰当时结合，可出现肉眼可见的沉淀线。 定向加速的免疫双扩 （双扩＋电场，使抗原、抗体相对泳动） Ag区带电泳＋双扩结合 方法 1、制琼脂板(3ml 1.5%NS琼脂） 2打孔（双孔型/三角孔型/梅花孔型 加样（平孔沿加满） 扩散（37C、24 h观察结果） 1.已知抗体+琼脂制板、打孔 2.在琼脂板小孔中加梯度抗原 3.抗原向四周扩散形成沉淀环 4.抗原浓度与沉淀环直径呈线性关系 绘制标准曲线 5.从标准曲线上查出并计算出待测标本含量 抗原、抗体分别在琼脂板上不同孔内，抗原在负极端，抗体在正极端，电泳。 电压：4~6v/cm(琼脂长度） 电泳时间：45分钟~1小时 1.Ag电泳分出区带 2.Ag、Ab免疫双扩 用途 1