酶的作用机理6.pptVIP

共价修饰反应的类型 蛋白质的磷酸化和脱磷酸化 （1）磷酸化酶 这类酶分别由其他酶催化，酶分子接受磷酸基或脱去磷酸基，酶活性发生改变。 乙酰辅酶A羧化酶是脂肪酸合成途径中的第一个酶，当有柠檬酸盐存在时引起亚基聚合，此酶有活力；除去柠檬酸或加乙酰CoA和软脂酰CoA时则引起酶解聚，使活力下降。 （三）别构调节 别构调节allosteric regulation：酶分子的别构部位与某些化合物可逆地非共价结合后发生构象的改变，进而改变酶活性状态，称为酶的别构调节。 由别构酶起作用调节代谢过程称别构调节。 别构抑制和别构激活 当别构效应物与酶结合，大大有利于后续分子与酶的结合，使酶的活力增加，称为别构激活，也称为正协同；反之，称为别构抑制，或负协同。细胞可以通过酶的别构使酶活力升高或降低以调节代谢。 别构效应物： （1）激素； （2）底物、产物或代谢途径的最终产物； （3）与该代谢酶系有关的辅酶及核苷酸类化 合物。 别构效应：酶分子的别构部位与某些化合物可逆地非共价结合后发生构象改变，进而活性改变。 别构酶的特点： （1）有多个亚基，都是寡聚酶。 （2）活性中心和别构中心位于酶蛋白的不同部位，或 处在不同亚基上，或在同一亚基上的不同部位。 （3）活性中心负责对底物的结合与催化，别构中心 则负责调节酶的反应速度。 （4）不遵循米氏方程 2. 别构调节有下述几种作用方式： （1）酶活力的反馈和前馈控制 反馈（feedback）是指反应系统中最终产物对初始步骤的酶活力的控制作用。可分为正反馈和负反馈。 正反馈：终产物可以激活初始步骤的酶 负反馈：终产物可以抑制初始步骤的酶 前 馈：在反应系统中，反应物对后续反 应酶的控制作用。 CTP利用率低，CTP浓度高，抑制天冬氨酸转氨甲酰酶的活力。 反馈、前馈是细胞中一种很巧妙的代谢调节方式。可避免反应中，反应物、产物过多积累和浪费，对生物体原料和能源的合理利用具有重要意义。 (2) 其他形式的别构调节 有一些别构酶还受核苷酸类化合物的调节，如酵解和TCA中一些酶活性可因ATP、ADP、AMP的存在而抑制或激活。 4.实例：天冬氨酸转甲酰酶 （anspartate transcarbamoylase， ATCase） ATCase所催化的反应 E.coli的ATCase的亚基排列 ATCase的半分子结构 ATCase的别构过渡作用 ATCase变构效应的动力学特征 (1) 别构酶的齐变模型 第八节 固定化酶 溴化氰亚氨碳酸基偶联法 戊二醛交联法 F-6-P + ATP F-1, 6-BP + ADP 磷酸果糖激酶 - + ATP、柠檬酸长链脂肪酸 ADPAMP 别构酶的动力学曲线 3. 别构酶动力学 符合米氏方程酶的双曲线 正协同别构酶的S型曲线 负协同别构酶的双曲线 V [S] 正协同的别构酶结合底物或变构剂后，构像的变化使酶对底物的亲合力大大增强。 负协同的别构酶与变构抑制剂结合后，在底物浓度较低的范围内酶活性增加较快，但底物浓度升高后，催化速率并不显著增加，这意味着高浓度的底物并不能形成高浓度的产物。 米氏酶 正协同 负协同 a b 正 米 负 别构酶与米氏酶反应速度比较 底物浓度从 a 变化到 b [S] V B: 正协同别构 酶的S形曲线 υ = 90% [S] = 9 υ =10% [S] = 3 = 3 [S] 9 [S] 3 90% Vmax 3 6 9 50% 100% [S] A B = 81 [S] 9 [S] 0.11 A: 非调节酶 υ = 90% [S] = 9 υ =10% [S] = 0.11 别构酶动力学曲线 别构酶的判别方法： Rs = 酶与底物结合达90%饱和度时的底物浓度 酶与底物结合达10%饱和度时的底物浓度 Rs= 81 是典型的米氏方程的酶 Rs﹤81 是具有正协同的别构酶 Rs﹥81 是具有负协同的别构酶 Rs判别法 Hill系数判别法 Hill 通过对变构血红蛋白的研究得出了Hill方程： Hill方程也适用于别构酶，对于别构酶，Hill方程可变为： n = 1 K′= Km，还原为米氏方程。 n﹤1 和 n﹥1 为别构酶 将上述方程进行变换、方程两边取对数得到： 以 对lg[S]作图，可得到一条直线， 该直线的斜率称为Hill系数。 Hill系数是判别别构酶和非别构酶的指标 lg[S] lg[S] lg[S] n = 1 n﹤1 n