HPLC法测定蘑菇粉等中水溶性维生素的含量.docVIP

???? HPLC法测定蘑菇粉等中水溶性维生素的含量 ???? ???? 　　摘要　本文探讨了应用HPLC法对食物中的水溶性维生素测定的一种方法。样品采用稀盐酸提取，经μ Bondapak C18柱分离，流动相为甲醇-水体系中加入0.1 mol／L NaAc，0.02％三乙胺用HAC调pH为4.18，254 nm处紫外测定。梯度洗脱，样品中7种水溶性维生素完全分离并定量测定。回收率为91.6～104.2％，相对标准偏差小于3.90％，线性相关系数在0.9950以上。　　关键词　HPLC　食品　水溶性维生素 The Determination of the Water-Soluble Vitamins inFood by High Performance Liquid Chromatography Huang Hongxia　　（Fujian station of Food Inspection，Fuzhou） Abstract　The water-soluble vitamines（Vit.C，Vit.B1、Vit.B2，Vit.B6，Vit.B12，nicotinic acid and nicotinamide）in food samples were separated on a μ-Bondapak C18 column with a mobile phase containing methanolwater（with 0.1 mol／L NaAc-HAc，0.02％ triethylamine，pH 4.18）and UV-254 nm detcction.The recovery was 91.6%～104.2％，RSD was less than 3.90％，and correlation coefficient was nore than 0.9950。Key　words　HPLC　Food　Vitamin 　　维生素是维持人体细胞正常功能所必需的物质，其中有一些维生素人体内不能合成，只能从食物或营养素补充剂中摄取、目前市场上各种强化维生素的食物不断出现，需要建立快速准确的检测方法。传统的维生素B1、B2的测定较多采用荧光分析法［1，2］。高效液相色谱分析，尤其是离子色谱法测定各种水溶性维生素近来报道较多［3，4，5］。由于离子对试剂价格昂贵，成本高，不易推广应用。本文采用稀盐酸对食物中水溶性维生素进行提取，在甲醇-水体系中加入盐类［6］对7种维生素进行分离和测定，方法简便，快速，重视性好。现报告于下。 1　实验部分 1.1　试剂　甲醇、醋酸钠、盐酸、三乙胺均为分析纯试剂。维生素标准液。维生素C，B1，B2，B6，B12，菸酸，菸酰胺均为生化试剂（纯度97％）。用蒸馏水分别溶解以上维生素标准品，使其浓度大约为1 ml相当于1 mg作为储备液（维生素C分析前配制）。使用前分别吸取维生素C，B6，B2 0.2 ml；维生素B1，菸酸、菸酰胺0.05 ml；维生素B12 0.05 ml于10 ml容量瓶，用水定容制成混合标样。1.2　仪器与测试条件　Waters液相色谱仪，M440紫外检测器，M730数据处理机。色谱条件　色谱柱：μ Bondapak C18 3.9×300 mm；流动相：A：甲醇，B：水（0.1 mol／L NaAc-HAc，0.02％三乙胺，pH4.18）。梯度洗脱（见表1）。流速：1 ml／min；检测波长：254 nm；灵敏度：0.05 AUFS。 表1　梯度洗脱 洗脱时间（min） 0～10 10～25 甲醇比例（％） 18 28 1.3　实验步骤　精密称取2～5 g样品，加入50 ml 0.1 mol／L HCl于70℃水浴中提取30 min。冷却后，用NaAc测pH值为4.18左右。定容至100 ml，过滤，滤液经0.45 μ滤膜过滤后备作进样，进样量为20 μl。 2　结　果 2.1　按2.3条件分别分离混合外标标液（见1）和食品中水溶性维生素（见2）。在该条件下样品及标样均能得到较好的分离。 1　混合标液色谱分离　　1.Vit.C，2.菸酸，3.Vit B1，4.Vit B6，5.菸酰胺，6.Vit.B12，7.Vit B2 2　蘑菇粉样品色谱分离中1，2，3～7同1 2.2　回收率试验　在蘑菇粉样品中加入被测组分，进行回收试验，结果（见表2），平均回收率为91.6～104.2％。2.3　重复性试验　取样品（部分被测组分模拟加入）在2.3条件下，重复进行6次试验，结果(见表3)，相对标准偏差小于3.90％。 表2　回 收 率 试 验 结 果 名　　称 原有量（mg） 添加量（mg） 测定量（mg） 回收率％ 维生素C 1.468 1.668 3.013