低表达线粒体蛋白ISCA2对线粒体功能影响的机制研究.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2018, 40(7): 1120–1129 DOI: 10.11844/cjcb.2018.07.0058 低表达线粒体蛋白ISCA2对线粒体 功能影响的机制研究 杨 玲 刘若兰 牛 欢 胡 立 李艳纯 王伟龙 李江辉 谭国强 吕建新* (温州医科大学检验医学院、生命科学学院, 温州 325035) 摘要 该文探讨了ISCA2蛋白低表达对细胞内铁硫蛋白和能量代谢的影响。在HeLa细胞内 将ISCA2基因敲低, 通过免疫印迹、顺乌头酸酶胶内酶活性分析法分析线粒体内外铁硫蛋白水平和 活性改变; 用紫外–可见分光光度法检测细胞线粒体内氧化磷酸化复合体活性; 用海马能量分析仪 分析细胞内能量代谢的改变。结果表明, ISCA2 报 蛋白低表达后, 氧化磷酸化复合体中各铁硫蛋白亚 基都出现不同程度的下调, 且对于线粒体[4Fe-4S]型铁硫蛋白亚基影响显著, 但对线粒体[2Fe-2S]型 铁硫蛋白亚基以及胞质[4Fe-4S]型铁硫蛋白亚基影响较小。同时, ISCA2蛋白低表达后对线粒体复 合体活性和线粒体能量代谢影响显著, 细胞有氧呼吸降低, 细胞外乳酸含量增加。这些结果表明, 学 ISCA2蛋白低表达后抑制铁硫簇的组装, 导致铁硫蛋白功能障碍, 影响线粒体复合体活性和氧化磷 酸化系统, 使得细胞能量代谢紊乱。 关键词 铁硫簇; 铁硫蛋白; 能量代谢 学 Elucidation of Roles of Protein ISCA2 in the Control of Mitochondrial Function 物 Yang Ling, Liu Ruolan, Niu Huan, Hu Li, Li Yanchun, Wang Weilong, Li Jianghui, Tan Guoqiang, Lü Jianxin* (School of Laboratory Medicine and Life Sciences, Wenzhou Medical University, Wenzhou 325035, China) 生 Abstract This article explored the effect of low expression of ISCA2 on intracellular iron-sulfur protein and energy metabolism. Firstly, we conducted the RNA-mediated knockdown of ISCA2 gene. And then, we detect- ed the activity changes of iron-sulfur proteins inside and outside the mitochondria by Western blot and in-gel activ- 胞 ity assay. Furthermore, the Seahorse Bioscience XF96 Extracellular Flux Analyzer was used to analyze the changes in intracellular energy metabolism. The results showed that the iron-sulfur subunits in respiratory chain complexes were decreased to some extent