常规植物石蜡制片技术的改进及应用.docVIP

基金项目:成都大学2011年自然科学基金,基金号:2011XJZ24。 作者简介:王静(1981－,女,四川冕宁人,博士,讲师,主要从事植物学与环境的教学和科研工作。 收稿日期:2011－05－09 常规植物石蜡制片技术的改进及应用 王 静 1 左幸 2 黄正文 1 (1成都大学城乡建设学院,四川成都610106;2二滩水电开发有限责任公司,四川成都610051 摘要:石蜡切片技术在植物科学技术研究领域扮演着十分重要的角色,并为植物组织结构的研究做出了巨大贡献, 现代植物分子生物学研究中仍需石蜡切片技术支持。以凹叶木兰的雌、雄蕊群及花被片作为实验材料,通过改良脱水、包埋、染色、分色等制片环节,设计了一种优良、易操作的植物组织石蜡制片方法,并对实验操作中常见的问题和注意事项进行了讨论。实验结果表明该方法简化了实验步骤,节约了实验药品,减少了实验中有毒试剂的使用和接触,提高了制片质量并使同一批制片染色效果统一。关键词:植物组织学;石蜡切片;改进和应用中图分类号 Q94 文献标识码 A 文章编号1007－7731(201111－36－04 Improvement and Application of Plant Paraffin Sectioning Wang Jing 1 (1College of Urban and Rual Construction ,Chengdu University ,Chengdu 610106,China Abstract :Paraffin Sectioning not only plays an important role in plant science research ,but also make a tremendous contri-bution to studying composition and structure of plant．Modern plant molecular biology still needs the technique．This study used the gynoecium ,androecium ,tepals of Magnolia sargentiana as experimental material ,improved traditional paraffin sec-tioning ,such as dehydration ,embedding ,stain ,separation．We discussed typital problems and caution items in the im-proved Paraffin Sectioning．The experimental results that the new technique simplified the process of paraffin sectioning ,saved experiment cost ,reduced touching toxic reagent ,obtained quality slides．Key words :Plant histology ;Paraffin sectioning ;Improvement amd application 近年来,随着新设备的出现,在经典石蜡切片技术的基础上,不断涌现出一些对植物组织结构研究的新技术,如超薄切片、半薄切片、冰冻切片等技术 [1－3] ,但这些方法 都是在经典的石蜡切片技术上发展而来的。至今,石蜡切片法仍为制片技术的经典方法,在植物组织学、比较解剖学、分类学、细胞学和发育生物学研究中得到广泛应用。此外,石蜡切片法能与其他新技术结合应用于免疫学、现代植物分子生物学等学科中,如将免疫荧光检测技术与石蜡切片相结合,用于抗原定位 [4] ;在用于细孢原位核酸分 子杂交技术中,可对材料中被杂交的DNA 分子进行定位、 定量分析或观察分析基因表达(mRNA 水平 [5－6] 。该法有容易操作和成本低廉的优点,且标本经石蜡包埋后,可进行连续切片或永久保存。 经典的石蜡切片法基本步骤包括样品的采集、固定、脱水(Ⅰ、透明(Ⅰ、浸蜡、包埋、切片、贴片、烘片、脱蜡、复水、染色、脱水(Ⅱ、分色、脱水(Ⅲ、透明(Ⅱ和封片等一系列特殊处理步骤 [7] 。由于石蜡材质的性状特点使 得经典的石蜡切片法存在较多制片难点。其中,影响实验 成败的主要原因包括:(1制片周期长,一般从材料固定到封片至少都要一周以上;(2脱水、透明、浸蜡、包埋的过程中操作不慎易使材料变脆、变硬或变形,从而影响染色;(3手续繁琐,染色前要脱蜡、水化处理,染色后又需脱水、透明;(4脱蜡后的切片在水化和脱水时,植物组织常由于对载玻片的粘附能力降低而脱落