大鼠腓浅神经传入纤维在脊髓胶状质的定位投射——FRAP法.docVIP

???? 大鼠腓浅神经传入纤维在脊髓胶状质的?定位投射——FRAP法 ???? ???? 　　摘　要　为了解大鼠腓浅神经传入纤维在脊髓胶状质(SG)的投射定位，按照跨神经节溃变原理，用抗氟化物酸性磷酸酶(FRAP)法和显微测量进行定量研究。结果显示：大鼠腓浅神经向SG的纵向投射主要为L2～6，L2～6各节段SG水平切面“眉毛状反应带”弧形长均值分别为0.795、0.849、0.913、0.921、0.852mm；而腓浅神经向L2～6各节段SG水平切面投射均值分别为0.447～0.533、0.384～0.561、0.351～0.598、0.338～0.611、0.383～0.561mm的范围。结果表明，腓浅神经反应带占据SG中间区域。　　关键词　腓浅神经　跨神经节溃变　胶状质　抗氟化物酸性磷酸酶法　大鼠 　　有关周围神经传入纤维向SG投射的研究，国内外不少学者曾有报道，如Knyihar和Csillik［1］曾切断大鼠左侧坐骨神经，4d内导致L4～S1节段SG内FRAP反应完全消失(水平方向的定位未作描述)。邱树华［2］用血管钳挫伤左侧坐骨神经，结果于L3～S1节段左侧SG中间内侧2/3部位的FRAP活性消失。朱培纯［3］、胡松林［4］等均做过这方面的研究，但对其局部定位均未作测量，本研究试在上述研究基础上对腓浅神经传入纤维在SG的定位进行显微测量研究，为针刺镇痛及内脏牵涉痛原理提供较为准确的形态学依据。 材料和方法 　　用健康Wistar大鼠20只，雌雄不拘，体重180～250g，水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg/kg)，然后在腓骨颈处切断腓浅神经(切断左侧5只，切断右侧5只，双侧切断10只)。非手术侧作为本实验的对照侧。依据跨神经节溃变时间［5］，术后存活7～12d，活体断头迅速暴露腰骶部脊髓，按神经根确定各节段并做标记。取出L1～S1脊髓，放在-15℃冰台上数分钟，按标记再分段，将各段分别置于-15℃恒冷切片机上做20～25μm的连续横切，每个节段又按上、中、下3部分贴片，将切片迅速吹干，固定于甲醛钙液内10min，按FRAP法［6］，以β-苷油磷酸为底物(pH 4.7)，硝酸铅为捕获剂加入0.02mmol/L氟化钠，以抑制胶状质以外其他部位溶酶体内的酸性磷酸酶(AcP)，在37℃恒温下孵育4～6h，经硫化铵处理，以显示胶状质内溶酶体外的FRAP。　　经上述处理后，再将显色的切片置于(10×10)光镜下，用物镜测微尺(0.01mm)标定好目镜测微尺(每1刻度为0.0134mm)，设胶状质的内侧端为“0”值，对各显色切片中双侧SG内FRAP活性的水平向“眉毛状反应带”长及其消失区进行观察测量，将所测值进行统计学处理，以确立腓浅神经传入纤维在SG的投射模式。 结果 　　非手术对照侧与手术侧L1下段、S1上段FRAP活性均呈黑色“眉毛状反应带”，未见消失区(1)；切断腓浅神经实验侧，L2～6节段SG中间带呈现宽窄不等的FRAP活性消失区(2～6)。L2～6各节段SG“眉毛状反应带”长及消失区测值亦不同，反应带L2为0.795mm，消失区在0.447～0.533mm范围(但上部5例、中部9例、下部17例)；L3为0.849mm，消失区在0.304～0.561mm范围；L4为0.913mm，消失区在0.351～0.598mm范围；L5为0.921mm，消失区在0.338～0.611mm范围；L6为0.852mm，消失区在0.383～0.561mm范围(但中部仅15例、下部9例)，各节段上、中、下3部分测值见附表。 附表　大鼠腓浅神经切断侧脊髓胶状质FRAP活性消失区测微匀值(mm) N:20Table The micromeasurements mean value of the FRAP activity disappearea area in SG of thespinal cord on the rats superficial peroneal nerve cut side 　 L2 ΣX L3 ΣX L4 ΣX 上upper 中medial 下lower 上upper 中medial 下lower 上upper 中medial 下lower 眉样反应带长the length of the eye-brow-like reactive zone N 20 20 20 　 20 20 20 　 20 20 20 VMax 0.871 0.871 0.871 　 0.938 0.938 0.938 　 1.005 1.005 1.005 VMin 0.670 0.670 0.670 　 0.670 0.737 0.737 　 0.804 0.804 0.804 X 0.791 0.794 0.80