低温脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达.pdf

23 4 极地研究 Vol． 23 ，No． 4 第 卷第 期 2011 12 CHINESE JOURNAL OF POLAR RESEARCH December 2011 年 月 櫑櫑櫑櫑毀 櫑 毀 櫑 研究论文毀 毀櫑櫑櫑櫑 低温脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达 1，2 1，2 1，2 1，2 1，2 王永杰 沈继红 丛柏林 林学政 黄晓航 1 2 ( ， 266061 ; ， 266061) 国家海洋局第一海洋研究所 山东青岛 海洋生物活性物质国家海洋局重点实验室 山东青岛 PCR lip -948 ， pPIC9K 提要 通过 技术扩增得到南极适冷菌低温脂肪酶基因 将其与表达载体 连接后转化巴斯德毕赤 GS115 ， ， 48 h 酵母 通过筛选得到高效表达低温脂肪酶的酵母菌株 该菌株发酵 后上清液中脂肪酶活力达到 27 ． 5 U ·mL － 1 ， 。 普遍高于其他细菌低温脂肪酶在毕赤酵母中的表达活性 关键词 低温脂肪酶 表达载体pPIC9K 巴斯德毕赤酵母 高效表达 doi :10 ． 3724 / SP． J． 1084 ． 2011． 00283 在洗涤业、 、 、 食品加工 生物制药 环境生物技术等领 0 引言 域有更加广阔的应用前景。 毕赤酵母表达系统是一种良好的外源基因表达 (lipase ，EC3． 1． 1． 3 ) ， 脂肪酶 是一类酯键水解 系统 它能稳定地表达外源基因并将外源蛋白分泌 酶， 、 ， 到胞外， ; ， 广泛地存在于动物组织 植物种子和微生物中 有利于产物的进一步纯化 另外 毕赤酵母 ( )， ， 它能在油水界面催化天然油脂 甘油三酯 将其降 表达系统除具有原核生物的一些特点外 如细胞生 。 、 ， ， 解为甘油和游离的脂肪酸 目前工业上使用的脂肪 长快 易于生长 遗传操作简单等 还能将外源基因 ， 50 ℃ 、 ， 酶基本上都是中温酶 最适酶活温度一般都在 进行糖基化 蛋白折叠和形成二硫键等翻译后修饰 ［