米碎花药效微小核糖核酸的鉴定及其靶基因功能分析.pdf

·80 · 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 1 期 2015 年 1 月 米碎花药效微小核糖核酸的鉴定及其靶基因功能分析 1, 2 2 2 2 2 2* 方 杰 ，胡毅翔 ，应华忠 ，俞文英 ，金晓音 ，余陈欢 1. 浙江中医药大学药学院，浙江 杭州 310053 2. 浙江省医学科学院 浙江省实验动物与安全性研究重点实验室，浙江 杭州 310013 摘 要：目的 筛选米碎花 Eurya chinensis 茎叶的微小核糖核酸（MicroRNAs ，miRNAs ）类药效物质及其靶基因功能分析。 方法 采用高通量测序法，测定米碎花、正常小鼠和喂食米碎花匀浆液小鼠肝组织及血浆中 miRNAs 的表达丰度，并与 GeneBank 上的植物 miRNAs 数据库比对，结合实时荧光定量 PCR （RTFQ-PCR ）验证，鉴定吸收进入体内的米碎花 miRNAs 。 以人类mRNA 为靶标，采用 TargetScan 与 MiRanda 预测米碎花 miRNAs 的靶基因，并通过基因功能聚类（GO ）与 KEGG 分析靶基因的相关功能。结果 共鉴定出 5 个米碎花 miRNAs 可吸收进入体内，其主要在生化过程、细胞成分和分子功能 3 大区域发挥作用，并影响肿瘤、代谢、炎症等相关信号通路。结论 miRNAs 可能是一类新型的中药药效物质。 关键词：药效物质；米碎花；微小核糖核酸；MAPK 信号通路；高通量测序 中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)01 - 0080 - 06 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.01.016 Identification of MicroRNAs from Eurya chinensis and function analysis on their target genes 1, 2 2 2 2 2 2 FANG Jie , HU Yi-xiang , YING Hua-zhong , YU Wen-ying , JIN Xiao-yin , YU Chen-huan 1. Pharmacy College, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China 2. Zhejiang Key Laboratory of Experimental Animal and Safety Evaluation, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310013, China Abstract: Objective To investigate the pharmacodynamic MicroRNAs (miRNAs) in Eurya chinensis and the functions of their target genes. Methods The miRNA profiles of E . chinensis in liver and plasma of normal mice and E . chinensis extract-treated mice were detected using high-flux sequencing, and then the miRNAs which took into the organism were validated by RTFQ-PCR using plant miRNA database in GeneBank. Human mRNA database as target was used to predict the target genes of miRNAs by TargetScan and MiRanda analysis, while the target gene functions were consi