反义治疗与白血病靶基因研究进展.docVIP

???? 反义治疗与白血病靶基因研究进展 ???? ????????关键词：寡核苷酸， 反义；白血病；基因,抑制????中国病理生理杂志000827 [中分类号] R733.7 Q786 [文献标识码] A????[文章编号] 1000-4718(2000)08-0764-05????Advanced studies on antisense oligonucleotide treatment????and target-gene of leukemia????LI Wen-yu, ZHANG -Yuan????(Institute of Hematological Disease, Medical College of Jinan University,Guangzhou 510632, China)????[A Review] The oncogene expression and growth of leukemic cells could be inhibited by antisense oligonucleotide. The selection of target genes is the key step in the research of antisense oligonucleotide on leukemia. The article would review the status and prospect of some target genes of leukemia in the investigation of antisense oligonucleotide.????[MeSH] Oligonucleotides,antisense; Leukemia; Genes,suppressor????反义技术是根据碱基互补原理，利用与目标靶DNA或RNA互补的短链片断封闭基因表达。反义技术用于抗白血病的理论基础，是用反义核酸中止原癌基因或癌基因的表达，使白血病细胞分化或凋亡，达到治疗的目的。其特点是，特异性强，对正常细胞无明显影响。反义核酸能在核酸水平上抗白血病，优于在蛋白水平的作用。基本内容包括：反义RNA、反义DNA、核酶(ribozyme)和三股螺旋DNA(DNA-Triplex)。主要通过下列作用之一或联合作用抑制靶基因表达：1.与双链DNA形成三链结构，使DNA转录受阻。2.结合靶mRNA，形成双链结构，激活核酶，降解靶mRNA或使靶mRNA翻译终止。3.使细胞表达核酶，降解特定基因片段。4.阻挡mRNA前体由核向胞浆转运或成熟，间接影响基因表达。急慢性白血病反义治疗的靶基因包括融合基因、点突变基因、正常基因、以及扩增基因。随着人类基因组计划的进行，新的基因会越来越多，基因靶点会越来越多，为反义技术带来广阔的前景。现就上述基因进行综述。????一、靶基因????1. 融合基因bcr/abl????慢性粒细胞白血病(chronic myelogonous leukemia, CML)细胞遗传学特征是胞内存在Ph染色体，大约95%CML患者Ph染色体阳性。Ph染色体是9号染色体上的c-abl原癌基因易位到22号染色体断裂点簇集区bcr，形成bcr/abl融合基因。根据bcr断裂点位置不同，此融合基因主要存在2种类型：bcr2/abl2(b2/a2，也称l-6型)和bcr3/abl2(b3/a2，也称k-28型)，二者仅相差75 bp，都编码一种P210蛋白。它比c-abl编码的P145有更强的酪氨酸激酶活性，为CML发病基础，能在体外转化造血细胞，诱导CML。bcr/abl融合基因为CML特异的，DNA序列单拷贝，并且较稳定，理论上适合作反义治疗[1]。????1991年，Szezylik等[2]研究了反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide, ASON)对CML的影响。5例l-6型CML患者白血病细胞，被针对b2/a2(l-6型)ASON(5’-GAAGGGCTTCTTCCTTAT-3’)不同程度抑制，抑制率60%～90%；5例k-28型CML患者白血病细胞，被针对b3/a2(k-28)ASON(5’-GAAGGGCTTTTGAACTCT-3’)抑制，抑制率60%～80%，与l-6型结果相似。正常骨髓细胞与CML骨髓细胞1∶1比例混合，与断裂点特异的ASON一起培养12 d后，与未加入ASON的对照组相比，CML的骨髓细胞克隆数明显减少，而正常骨髓细胞克隆数无变化。说明ASON对正常细胞无抑制作用。若在k-28型CML中加入l-6型ASON，仅有2.5%～5%细胞生长被抑制，与未加入ASON组无明显差异，针对b