第二章 酶反应动力学1.pptVIP

（2）pH H+、OH-能对反应体系产生多种影响； 改变活性中心的解离情况； 破坏酶的结构与构象导致酶失效； 作用反应系统的其它组成成分； 改变可逆反应进行的方向。 酶反应通常借助缓冲体系来控制pH，在选择缓冲体系时应考虑以下问题： 选择的离子的pK值应接近要调整的pH (缓冲能力)； 缓冲离子不同，同一酶反应所表现的活性可能各不相同，甚至最适pH也可能发生变化； 某些缓冲离子可能与酶活性的某些必要成分形成络和物，从而导致酶活性的抑制(EDTA) 某些缓冲体系可能因稀释和温度变化而改变其pH值； 缓冲组成体系有时能被反应体系降解破坏； 缓冲组成体系在可见和紫外光区应无吸收； 价廉易于制备 （3）温度 温度既影响化学反应速度本身，也能影响酶的稳定性，还可能影响酶的构象和催化机制。 国际生化联合会在1961年建议采用25?C为酶反应的测定温度，到1964年则建议改为30?C。 （4）辅助因子 有些酶需要金属离子，有些酶则需要辅酶物质，在测定酶活性时应考虑这些因素； 为了提高酶在反应系统中的稳定性，有时还需要加入某些相应的物质； 考虑到某些酶的反应特点，在酶反应系统中最好同时包含应用时可能产生影响的因素 （5）样品(一般需要纯化) 许多待测样品是粗的发酵液或细胞抽提液，其中可能包含各种干扰因素； 样品的稀释效应 影响酶的稳定性； 降低样品中原有抑制因素和辅助因素的浓度。 （6）空白和对照 每个酶反应通常都应该有适当的空白和对照。 空白：指杂反应和自发反应引起的变化量，它提供的是未知因素的影响。 空白值：指从不加酶、不加底物或两者都加，但酶预先经过失效处理的反应系统系统测得的结果。 对照：是指用纯酶或标准酶制剂测得的结果，主要作为比较或标定的标准。 3，测定方法 化学法 放射化学测定法 光学法 电化学测定法 量气法 酶偶联分析法 其它 粘度法 比浊法(角蛋白酶) 4，测定 测定对象：和一般化学反应一样，酶反应速度可用单位时间内反应物的减少或产物的增加来表示 测定初速度 测定要达到的要求：酶活力测定的目的就是通过酶反应速度的测定求得酶的浓度或含量，因此测得的反应速度必须和酶浓度间有简单的线性比例关系。 5，酶的单位 酶单位，是指在特定条件下，要使酶反应达到某种速度所需要的酶量。 1961年，国际生化联合会酶委员会建议：一个酶单位（IU）定义为在酶反应最适条件下（ 25?C ），每分钟催化1μmol底物转化所需的酶量。 1972年，酶委员会又提出一种新的酶单位Katal（Kat），一个Kat定义为最适反应条件下（ 30?C ），每秒钟催化1mol底物发生转化所需的酶量 1Kat=60×106IU 第二章 酶反应动力学 刘松 liusong830@yahoo.cn 研究酶反应动力学的意义 是酶分析、酶反应器、酶作用原理以及酶生物学研究的重要基础和手段。 教学内容 第一节 酶促反应动力学 第二节 抑制剂对酶反应的影响 第三节 固定化酶催化反应动力学 第四节 pH对酶反应的影响 第五节 温度对酶反应的影响 第六节 酶活力测定 重点掌握：米氏方程、pH和温度与酶活的关系、 酶活力的定义和测定 第一节 酶促反应动力学 酶反应动力学体系 米氏方程的推导(v＝VmaxS/(Km+S)) 米氏方程的物理意义 米氏方程的某些重要表达形式及图形 双倒数作图 米氏方程的适用范围 第二节 抑制剂对酶反应的影响 抑制剂的类型 可逆抑制的动力学 可逆抑制和不可逆抑制的相似性 抑制和活化 过渡态底物类似物 第三节 固定化酶催化反应动力学 研究固定化酶反应动力学的意义 固定化酶的动力学参数和性态 参考： 1，陈石根等，酶学，复旦大学出版社，2001 2，陈 声等，固定化酶理论与应用，轻工业出版社，1987 第四节 pH对酶反应的影响 酸、碱对酶稳定性的影响 pH对酶活力的影响 研究pH对酶反应影响的意义 一、酸、碱对酶稳定性的影响 酶都有一定的酸、碱稳定性范围，超过这个范围后，酶就会变性失活。 酶的pH稳定性的测定 将酶配制成一定的浓度，分别置于不同pH溶液中保温一定时间；(缓冲液稀释) 保温结束后，将酶液调整至某一共同的pH进行酶活性测定； 将测得结果绘成酶的稳定性- pH曲线 谷氨酰胺转胺酶的pH稳定性 酶的pH稳定性的测定时需注意的问题 注意介质的组成成分和温度条件，因为它们也可能和pH同时对酶的稳定性产生影响； 酸、碱对酶的破坏作用是随时间累积的，因此应注意在相应条件下的保温时间。 二、pH对酶活力的影响 观察pH对酶促反应速度的影响，通常为一“钟形”曲线，即pH过高或过低均可导致酶催化活性的下降。 酶催化活性最高时溶液的pH值就称为酶的最适pH。酶的最适pH