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实验三 根系活力的测定 植物根系的主要作用 对地上部分起支持和固定作用 物质的储藏 对水分和无机盐类的吸收 合成氨基酸、激素等物质 实验目的 熟悉测定根系活力的各种方法及测定原理 1、α-萘胺氧化法 2、甲烯蓝吸附法 3、氯化三苯基四氮唑(TTC)法 本实验采用α-萘胺氧化法 α-萘胺氧化法测定根系活力原理： 植物根系能氧化吸附在根表面的α-萘胺，生成红色的α-羟基-1-萘胺，沉淀于有强氧化力的根表面，使这部分跟染成红色。 根对α-萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切关系。有报道认为α-萘胺的氧化本质就是过氧化物酶的催化作用。该酶的火力越强，染色就越深。所以根据染色深浅半定量地判断根系活力的大小，还可测定溶液中未被氧化的α-萘胺量，定量地测定根系火力大小。 α-萘胺在酸性环境下与对氨基苯黄酸和亚硝酸 盐作用产生红色的偶氮染料，可供比色测定 α-萘胺含量 器材与试剂 实验仪器 分光光度计，分析天平，量筒，移液管，容量瓶 实验试剂 25ug/mlα-萘胺溶液,0.1mol/L磷酸缓冲液，1%对氨基苯黄酸，亚硝酸钠溶液 实验材料 小麦 植株 绘制α-萘胺标准曲线 取浓度为50ug/ml的α-萘胺,配制成50、40、30、20、10mg/ml的溶液，各取2ml放入容量瓶，加10ml蒸馏水，再加入1%对氨基苯黄酸，亚硝酸钠溶液各1ml，室温5min后加蒸馏水定溶至25ml，在510nm处比色，读取OD值， 绘制标准曲线。 实验步骤 4、在做有根烧杯的同时加做一组无根的空的对照，按步骤2、3操作，作为α-萘胺自动氧化比值,在结果中减去部分数值 实验结果 利用分光光度计测得: a初=0.169 a终=0.302 b初=0.392 b终=0.507 c = a初- a终=-0.133 d=b初- b终=-0.179 y=c-d=0.046 代入方程y=0.1446x+0.024 得x=0.1521 x/根鲜重×min=0.0507 注意事项 根系应吸干水分，且不能用力挤压细胞，才能测定准确 对同一组试管中，要求30min的时间操作下，保持操作准确 本实验设置实验对照组 Thank you!!! * * 南京晓庄学院生命科学系 1、取小麦植物，用水洗净根系上的泥土，剪下根系再用水洗，待洗净后用滤纸吸去表面的水分，取0.5克于烧杯,加α-萘胺溶液与磷酸缓冲溶液各5ml,静止10min后, 吸取2ml溶液,用于测定α -萘胺含量,将剩余的8ml 溶液,置于抽屉中30min 后再进行测定 2、吸取2ml待测液放入25ml容量瓶中，加入10ml蒸馏水，再在其中加入1%对氨基苯黄酸各1ml，室温放置5min，待混合液变成红色，再用蒸馏水定溶到25ml，在20-60min内510nm处比色,读取OD值，在标准曲线上查得相应α-萘胺浓度 3、将放汝抽屉中的烧杯拿出（在规定30min后），吸取2ml溶液放入25ml容量瓶中，加入10ml蒸馏水，再加入1%对氨基苯黄酸和亚硝酸钠溶液各1ml，室温放置5min，待混合溶 液变成红色，再用蒸馏水定容到25ml，在20- 60min内，510nm处比色，读取OD值，查得浓 度。 α-萘胺氧化总量:a初-a终 (c) α-萘胺自发氧化总量b初-b终 (d) α-萘胺生物氧化浓度c-d=y 将y代入方程求得x x/根鲜重×min *
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