临床PCR检验标本采集处理办法保存与核酸提取方式.pptVIP

如为提取核酸后用于DNA扩增分析的标本，可于10mmol/LTris,lmmol/LEDTA(pH7.5~8.0)缓冲液中4℃保存。用于RNA扩增分析的标本，则应于上述缓冲液中—80℃或液氮下保存。核酸的乙醇沉淀物则可于—20℃下保存。 * 去除或减轻抑制的一些方法 加入0.6% (wt/vol)牛血清白蛋白（BSA）可降低血液对Taq DNA聚合酶的抑制效应，既使在2%（vol/vol）血液存在下亦可成功扩增，而通常血液含量只能是0.2%。 BSA也可增加Taq DNA聚合酶的扩增能力，使其对粪便和肉类标本中抑制物的抵抗能力分别提高10和20倍。 单链DNA结合T4基因32蛋白（gp32）有类似BSA的增强效应。 核酸纯化 核酸分离纯化技术起源于二十世纪五十年代，在七十年代和八十年代中传统的核酸沉淀溶解分离纯化方法得到了普遍的应用和推广。 传统的核酸提取方法常涉及去垢剂裂解、蛋白酶处理、有机溶剂提取及乙醇沉淀等步骤。 一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理 靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测定的是病原微生物,则靶核酸存在于细菌、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述细胞破裂,则靶核酸亦可存在于细胞外。 一般均使用去垢剂(如Triton-100)裂解细胞，用一种蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消化结合于核酸的蛋白质，从而将靶核酸从细胞内释放出来。