流式细胞术单细胞水平同时检测RNA和蛋白.PDFVIP

PrimeFlow RNA分析技术 流式细胞术单细胞水平同时检测RNA和蛋白 利用流式细胞术 同时检测RNA和蛋白 利用全新的Invitrogen™ PrimeFlow™ RNA分析，科学家们现在可以 同时揭示数百万个单细胞内的RNA和蛋白表达动力学。该分析采用 了专利的FISH和bDNA信号放大技术，可在标准流式细胞仪上同时 检测单细胞中多达4种RNA转录本，使用Invitrogen™ A lexa Fluor™ 488 、Alexa Fluor™ 568 、Alexa Fluor™ 647和Alexa Fluor™ 750染料 标记。RNA检测可与细胞内和细胞表面抗体染色相结合，以提高对 单细胞动力学的认识。 主要特点： 分析技术 • 单细胞水平的基因表达异质性 荧光原位杂交(FISH)技术广为人知，可实现固定细胞中核 • 单细胞中的RNA和蛋白质动力学 糖核酸靶点的特异性定位。应用的基本前提是通过核酸探 针杂交检测核酸，从而提供了单细胞水平的基因表达信 • 检测细胞亚群中的非编码RNA 息。由于非特异性结合和低效的信号放大，传统的FISH技 • 评估感染细胞中的病毒RNA 术往往受到高背景和低灵敏度的限制而无法广泛应用。 • 抗体选择有限时分析mRNA表达水平 • 同时分析多达4种RNA转录本 • 流式细胞术检测microRNA (miRNA) 2 PrimeFlow RNA分析的原理 PrimeFlow RNA分析将专利的寡核苷酸探针组设计与分支 PrimeFlow RNA分析基于成熟且有大量文献支撑的ViewRNA DNA (bDNA)信号放大技术相结合，利用流式细胞术分析 技术开发而成，它利用显微镜分析细胞和组织内的RNA 。 RNA转录本。bDNA技术提供了独特的RNA检测和信号放 改进后的PrimeFlow RNA分析将成对寡核苷酸探针设计与 大方法，通过放大报告基团信号而不是靶序列(如PCR) ，有 bDNA信号放大技术还有流式细胞术相结合，可以在标准 助于获得较PCR的分析一致性更高的结果。在PrimeFlow 流式细胞仪上可靠地检测单细胞中多达4种RNA转录本。 RNA分析中，靶点特异性的探针组包含20至40个可与目标 Figure 3A RNA转录本杂交的寡核苷酸对(图1) 。信号放大的原理是， Label Probe 标记探针 相邻的寡核苷酸对与bDNA结构(包括信号预放大探针、放 Amplifier