几种微血管形态学观测方法间的比较分析.docVIP

?技术方法?几种微血管形态学观测方法间的比较分析 张卫光1,　冯凤芝2,　夏家骝1,　田　珑1,　严宗毅1 (1.北京大学医学部解剖学与组织胚胎学系,北京100083;　2.中国医学科学院北京协和医科大学北京 协和医院,北京100730 　　 　　【摘要】目的:通过对6种微血管形态学观测方法的比较,使研究者能够选择出最适宜的实验方法。 方法:针对每一种方法,进行实验方法的简介和分析。结果:6种方法间各有所长。结论:研究者应根据实 验的要求和条件,选择出一种方法或几种方法相结合,以达到研究的目的。 【关键词】微血管;　形态学;　方法学 【中图分类号】R322　【文献标识码】A　【文章编号】1001-165X(200304-0408-03 The comparison and analysis among a few methods on microvascular observation and measure ZHA N G Wei2guang3,FEN G Feng2z hi,XIA Jia2liu,et al. 3Depart ment of A natomy and histoembrology,Peking U niversity Health Science Center,Beijing100083, China 【Abstract】Objective:To select a optimal method on microvascular observation and measure via comparison and analysis among6kinds of morphological methods.Methods:Each of methods was briefly introduced and an2 alyzed.R esults:Each of methods has its own advantages and disadvantages.Conclusion:According to different experimental need and condition,researchers should select a suitable method or integrate several methods. 【K ey w ords】microvessel;　morphology;　methodology 　　微血管通常是指管径小于300μm的血管,主要包括微动脉、微静脉和毛细血管等,是研究组织和器官微循环的基础。而人肉眼的最小分辨率为200μm,因此对微血管的观察和测量需借助显微镜利用一些特殊的方法进行。近年来,随着内皮型一氧化氮合酶(en2 dothelial nitric oxide synthase,eNOS等血管活性物质影响微血管舒缩功能研究的深入,对观察和测量微血管管径的实验方法和技术的要求也不断地提高。本文针对目前实验室中经常采用的几种方法,作一比较分析其利弊,旨在为实验研究者提供更好的帮助。 1　组织切片苏木精-伊红(hematoxylin-eosine,H-E染色法 方法:取材后,组织经常规石蜡或冰冻切片,切片厚2~10μm,入水后先后经苏木精和伊红染色,酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。 分析:H-E染色法是实验室最常用的方法。其优点是方法简单快捷,如果是冰冻切片,30min或更短的时间内即可知道结果,而且该技术容易掌握,花费低。光镜下,血管及内皮细胞的形态保持良好,细胞核染成兰色,细胞浆染成红色。其缺点是:组织(如石蜡 【收稿日期】2002-07-21 【基金项目】国家自然科学基金“985”跨学科项目资助 【作者简介】张卫光(1970-,男,山东聊城市人,硕士,讲师,主要从事微血管结构和功能研究,Tel:(01062092466,E2mail:zhangook@ 。切片经酒精脱水后收缩较严重(约10%~15%;因为切片很薄,所显示的微血管均为断面,血管的连续性差,其中绝大多数的断面并不是与微血管长轴相垂直的横断面,会出现多种情况影响测量的结果(图1 。 图1　不同的情况下所形成的4种微血管断面示意图 Fig.1　These sketch showed four kinds of microvessel sec2 tions under different conditions 2　墨汁灌注组织学切片法 方法:例如心脏,左、右冠状动脉或主动脉(动物插管,墨汁灌注后24h取材,组织以火棉胶或混合蜡[1](凡士林∶蜂蜡∶石蜡=1∶2∶3配制包埋,推拉式火棉胶切片机切片,切片厚度可在20~200μm之间选择。二甲苯脱蜡,中性树胶封固。 分析:墨汁