CFP荧光蛋白文库构建及FRET.PDFVIP

网络出版时间：2013-11-25 10:20 网络出版地址：/kcms/detail/31.2035.Q1020.004.html 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(12): DOI: 10.11844/cj cb.2013.12.0245 CFP荧光蛋白文库构建及FRET技术 筛选钙调素结合蛋白 1,2 1 1 3* 孟凡力 关 珊 刘晓进 李朝军 1 2 3 ( 南京师范大学生命科学学院, 南京2 10023; 南京医科大学基础医学院, 南京2 11166; 模式动物所, 江苏省分子医 学生物技术重点实验室, 南京大学医学院, 南京2 10093) 摘要 钙调素(Calmodulin, CaM)是细胞内Ca2+信号的主要受体, 能够与靶蛋白相互结合调 节靶蛋白的活性, 在细胞增殖、分化、凋亡、迁移等过程中都起着重要作用。荧光共振能量转移 (fluorescence resonance energy transfer, FRET)技术是目前研究蛋白质相互作用比较成熟的方法之 一。作者通过Cre-loxP位点特异性重组技术构建了带有CFP 荧光蛋白标记的文库, 与YFP-CaM共同 转染Hela细胞, 应用荧光共振能量转移技术(FRET)进行检测, 挑取发生FRET作用的单个细胞, 并进 行单细胞PCR检测。由此扩增出的片段通过测序和蛋白序列数据库NCBI进行序列比对后, 筛选出 与CaM产生相互作用的蛋白。目前, 已经通过这种方法成功地筛选到了一些与CaM相结合的蛋白, 从而为进一步研究CaM蛋白在生理环境下的作用提供有力条件。 关键词 钙调素; Cre-loxP; 荧光共振能量转移; 单细胞PCR Construction of CFP-labeled Protein Library and Screening Calmodulin Binding Proteins by FRET Technology 1,2 1 1 3* Meng Fanli , Guan Shan , Liu Xiaojin , Li Chaojun 1 2 ( College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing 210046, China; School of Basic Medical Sciences,