血红蛋白的提取与分离工作.pptVIP

十二烷基硫酸钠 十二烷基磺酸钠 在生化、免疫检验方面作试剂用的SDS， 一般都是指十二烷基硫酸钠。实验中十二烷基硫酸钠最常见的用途是作为蛋白质的变性剂和助溶性试剂 ( 例如 SDS)， 它能断裂分子内和分子问的氢键 ， 使分子去折叠，破坏蛋白质的二级和三级结构 。几乎所有的蛋白质可以溶解在十二烷基硫酸钠中， 甚至包括疏水和变性的蛋白质。 三、操作提示 1.红细胞的洗涤： 洗涤次数：过少，无法除去血浆蛋白； 离心速度：过高和时间过长，会使白细胞等一同沉淀，达 不到分离的效果。 2.色谱柱填料的处理： 干燥的凝胶颗粒使用前需直接放在洗脱液中膨胀。为了加速膨胀，可以将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至近沸腾，通常只需1～2h。该方法节约时间，并可除去凝胶中带有的微生物，排除胶粒内的空气。 三、操作提示 3.凝胶色谱柱的装填 在色谱柱中装填凝胶的时候要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。在凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。一旦发生这种情况，凝胶色谱柱需要重新装填。 三、操作提示 4.蛋白质的分离 在蛋白质分离过程中，仔细观察红色区域带在洗脱过程中的移动情况。如果红色区带均匀一致移动，说明色谱柱制作成功