《等电点电泳 原理 步骤 详细》.pptVIP

/ 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 上海交通大学医学院 （二）支持介质(medium)的选择 作用：防止扩散 抗对流 liquid medium：蔗糖、Ficoll gel medium：agarose、sephadex、PAG 上海交通大学医学院 （三）聚焦后的检测方法 各种染色法 扫描与定量 其它检测方法 上海交通大学医学院 讲课内容 IEFE定义 1 IEFE的特点 2 IEFE的基本原理 3 IEFE的应用 4 血红蛋白的等电聚焦电泳（实验） 5 上海交通大学医学院 四、IEFE的应用Applications of IEF 1.分析分离制备蛋白质、多肽 ①区分人血清蛋白 ②测出异常免疫球蛋白 ③基因分型 ④csf中寡克隆区带的检测 2.测定pI可鉴定蛋白质、多肽 3.双相电泳中，IEF作为第一相 上海交通大学医学院 双向电泳（two-dimensional electrophoresis, 2-DE） 上海交通大学医学院 考马斯亮蓝 银染 上海交通大学医学院 讲课内容 IEFE定义 1 IEFE的特点 2 IEFE的基本原理 3 IEFE的应用 4 血红蛋白的等电聚焦电泳（实验） 5 上海交通大学医学院 实验 血红蛋白的等电聚焦电泳 Hb具有四条多肽链（α、β、γ、δ）  上海交通大学医学院 HbA 正常成人血中主要的Hb成分。 HbA2 正常成人Hb中的一个次要成分，当  胎儿出生时，其浓度不到1%，以后 稍增多，在正常成人中其平均值自 2.2% 至2.6%左右，最高范围一般 不超过3.5%。 上海交通大学医学院 HbF 1866年发现，是胎儿和初生儿的Hb的主要成分，足月的初生婴儿血中大约有70-80%为HbF，其余为HbA。婴儿出生后不久，HbF的浓度迅速减少，同时HbA相应增多，绝大多数正常人于出生后6个月至2年后，HbF便降至成人的正常浓度，以后HbF一直存在。 上海交通大学医学院 [器材] 电泳仪 凝胶玻管 三角烧杯 10cm长针头 上海交通大学医学院 [试剂] Acr-Bis TEMED、AP Ampholine 电极缓冲液（5%H3PO4、2%NaOH） 上海交通大学医学院 李莉 等电聚焦电泳Isoelectric Focusing Electrophoresis，IEFE 上海交通大学医学院 讲课内容 IEFE定义 1 IEFE的特点 2 IEFE的基本原理 3 IEFE的应用 4 血红蛋白的等电聚焦电泳（实验） 5 上海交通大学医学院 一、IEFE 定义 IEFE一种利用具有pH梯度的支持介质分离等电点（isoelectric point，pI)不同的蛋白质的电泳技术。 Isoelectric focusing (IEF), is a technique for separating different molecules by their electric charge differences. 上海交通大学医学院  等电聚焦(Isoelectric focusing ,IEF)就是在电泳介质中放入载体两性电解质(Carrier ampholyte)，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，在此体系中，不同的蛋白质即移动到或聚焦于其相当的等电点位置上，也就是说被聚焦于一个狭的区带中，电泳技术中的等电点聚焦也称为聚焦电泳。 上海交通大学医学院 讲课内容 IEFE定义 1 IEFE的特点 2 IEFE的基本原理 3 IEFE的应用 4 血红蛋白的等电聚焦电泳（实验） 5 上海交通大学医学院 二、IEFE的特点 （一）优点 High Resolution High Sensitivity Good Reproduction 上海交通大学医学院 （二）缺点 1.要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀。 2.样品中的成分必须停留在其pI，不适用在pI不溶或发生变性的蛋白质。 上海交通大学医学院 分辨率(resolution)较不连续PAGE更高，特别适合于分离分子量(molecuar weight,MW)相同而电荷(electric charge)不同的生物大分子。 Q M = ——