生物化学和分子生物学DNA损伤和修复.ppt

人类的DNA损伤核苷酸切除修复 ① 首先由损伤部位识别蛋白XPC和XPA等，再加上DNA复制所需的SSB，结合在损伤DNA的部位； ② XPB、XPD发挥解旋酶的活性，与上述物质共同作用在受损DNA周围形成一个凸起； ③ XPG与XPF发生构象改变，分别在凸起的3′-端和5′-端发挥核酸内切酶活性, 在增殖细胞核抗原（PCNA）的帮助下，切除并释放受损的寡核苷酸； ④ 遗留的缺损区由聚合酶δ或ε进行修补合成； ⑤ 最后，由连接酶完成连接。 NER不仅能够修复整个基因组中的损伤，而且能拯救因转录模板链损伤而暂停转录的RNA聚合酶，即参与转录偶联修复（transcription-coupled repair）。 作用方式：NER蛋白质被募集于暂停的RNA聚合酶。 转录偶联修复的意义：将修复酶集中于正在转录DNA，使该区域的损伤尽快得以修复。 碱基错配修复（ mismatch repair） 错配是指非Watson-Crick碱基配对。 碱基错配修复也可被看作是碱基切除修复的一种特殊形式，主要负责纠正： ① 复制与重组中出现的碱基配对错误； ② 因碱基损伤所致的碱基配对错误； ③ 碱基插入； ④ 碱基缺失。 E.coli错配修复系统修复复制差错 Dam甲基化酶（methylase）使E.coli处于暂时的半甲基化状态，标记母链和新合成的DNA链，帮助新合成的DNA链被错配修复系统识别并修复。 模板链的GATC序列甲基化 MutH仅切割新合成的DNA链 MutH的切口位于错配核苷酸的5?侧，使用外切酶Ⅶ或RecJ，按5??3?方向降解DNA； 切口位于错配的3’侧，则使用外切酶Ⅰ，按3?? 5?方向降解DNA。 DNA聚合酶Ⅲ填补所产生单链DNA缺口。 MSH（MutS homologs）蛋白 与MutL同源的MLH和PMS蛋白 真核细胞错配修复系统无MutH，也无半甲基化标记母链。 错配修复系统利用冈崎片段连接前的DNA缺口辨别错配碱基所在的DNA链。 真核细胞核苷酸修复错配系统： 三、DNA严重损伤时需要重组修复 同源重组修复 非同源末端连接的重组修复 同源重组修复 四、某些修复发生在跨越损伤DNA的复制事件之后 重组跨越损伤修复 合成跨越损伤修复 SOS修复中LexA-RecA操纵子的作用机制 DNA损伤和修复的意义 The significance of DNA damage and repair 第三节 二、DNA损伤修复障碍与肿瘤等多种疾病相关 DNA损伤与肿瘤、衰老以及免疫性疾病等多种疾病的发生有着密切的关联 目录 目录 生物化学与分子生物学 DNA损伤与修复 DNA Damage and Repair 第十五章 各种体内外因素所导致的DNA组成与结构的变化称为DNA损伤（DNA damage） 其一，DNA的结构发生永久性改变，即突变 其二，导致DNA失去作为复制和/或转录的模板的功能 DNA损伤的后果: 生物多样性依赖于： DNA突变 DNA修复 平衡 DNA损伤 DNA Damage 第一节 一、多种因素通过不同机制导致DNA损伤 （一）体内因素 DNA复制错误 DNA自身的不稳定性 机体代谢过程中产生的活性氧 DNA复制错误： 在DNA复制过程中，碱基的异构互变、4种dNTP之间浓度的不平衡等均可能引起碱基的错配 DNA复制的错配率约1/1010 复制错误还表现为片段的缺失或插入。 特别是DNA上的短片段重复序列，在真核细胞染色体上广泛分布，导致DNA复制系统工作时可能出现“打滑”现象，使得新生成的DNA上的重复序列拷贝数发生变化。 DNA自身的不稳定性 ： DNA结构自身的不稳定性是DNA自发性损伤中最频繁和最重要的因素。 当DNA受热或所处环境的pH值发生改变时， DNA分子上连接碱基和核糖之间的糖苷键可自发发生水解，导致碱基的丢失或脱落，其中以脱嘌呤最为普遍。 含有氨基的碱基还可能自发脱氨基反应，转变为另一种碱基，即碱基的转变，如C转变为U，A转变为I（次黄嘌呤）等。 （二）体外因素 物理因素 化学因素 生物因素 物理因素：电离辐射、紫外线(ultra violet, UV) 化学因素： 自由基导致的DNA损伤 碱基类似物导致的DNA损伤 碱基修饰剂、烷化剂导致的DNA损伤 嵌入性染料导致的DNA损伤 物理和化学因素对DNA的损伤 二、DNA损伤有多种类型 碱基脱落 碱基结构破坏 嘧啶二聚体形成 DNA单链或双链断裂 DNA交联 碱基损伤与糖基破坏： 化学毒物可通过对碱基的某些基团进行修饰而改变碱基的性质。 由于碱基损伤或糖基破坏，在DNA链上可能形成一些不稳定点，最终可导致DNA链的断裂。 碱基之间发生错配 ： 碱基类似物的掺入、碱基修饰剂的作用可