药物分离纯化技术应用绪论.ppt

⑤Rh2分子作用机制研究： 未纯化的Rh2在体外培养的Morris肝癌细胞中诱发表型地转录，而且扣留人肝癌细胞的细胞周期，通过蛋白水解caspase-3的底物（ADP-核糖）多聚酶，激活caspase-3诱发人肝癌细胞SK-HEP-1细胞的凋亡； 纯化的Rh2在G1期和S期抑制B16黑色素瘤细胞的细胞周期过程，激发黑色素生成，诱发不能转录的表型的表达； Rh2抑制了人类血液中淋巴细胞的姊妹染色体交换的形成； 人参皂苷的混合在体外能增加NDA多聚酶的活性。 Cdk2是细胞周期过程中G1期和S期的中重要激酶。 日本学者的研究发现Rh2抑制了在G1期扣留的B16黑色素瘤细胞的Cdk2的活性，而对S期扣留的细胞没有抑制作用。 一般认为，Rh2对肿瘤细胞具有生长抑制作用。 该作用是通过诱导分化和引起细胞凋亡实现的。 （9）人参皂苷对兴奋毒损伤的保护作用。 ①人参皂苷对谷氨酸（Glu）兴奋毒引起神经细胞损伤的保护作用： Glu对神经细胞的毒性作用： Glu是中枢兴奋性氨基酸递质，它与神经细胞的作用过程为，正常情况下，Giu与突触后膜NMDA（N-甲基-D-门冬氨酸）受体结合，引起Ca+内流，然后通过神经末梢质膜上的摄取系统，从突触间隙内摄取释放Glu，也可通过Ca+、Na+、K+-ATP酶转运系统试Ca+从细胞内流出，终止Glu作用。 过量的Glu促使突触前过量的蛋白激酶C（PKC）向细胞膜转移并活化，从而过度激活突触后膜的Glu受体-NMD受体，促使Ca+内流。 细胞内Ca+浓度上升又激活细胞内的硫蛋白酶，引起细胞内骨架蛋白-fordrin降解，使膜上Giu结合位点数量明显增加，导致胞内Ca+超载，出现迟发型损害。 b.人参皂苷的保护作用： 神经节苷酯可以防护PKC与膜的结合于活化，从而阻断过量PKC反应。 人参皂苷可使原代培养的神经细胞的神经节苷酯含量大约增加1.5倍，从而可对兴奋毒引起的神经细胞损伤起到保护作用。 ②通过减低神经细胞Ca+浓度，使细胞内Ca+积聚，浓度上升，引起神经元损伤、死亡。 人参皂苷与神经细胞温育10min后，可选择性地降低胞内Ca+浓度，可能是因为人参皂苷能特异性地抑制Glu被摄取进入大脑突触体中，相应减少过量Glu的兴奋毒损伤作用。 （10）人参皂苷对乙酸铅胚胎发育毒性的拮抗作用（自学） （11）人参皂苷对脐血细胞凋亡的抑制作用（自学） （12）人参皂苷的免疫增强作用： ①人参皂苷促进NK细胞活性的可能机理： GS直接作用于NK细胞；通过诱生IFN-r间接增强NK细胞活性；通过诱生IL-2间接增强NK细胞活性。 另外，杨中辉等人应用外源ACTH（促肾上腺皮激素）诱发Swiss小鼠肾上腺皮质酮分泌的增加，同时也导致小鼠NK细胞的活性。 T细胞转化活性的抑制，这种抑制与皮层酮升高水平呈正相关性。 应用GS可以抑制外源ACTH所致的肾上腺皮质分泌的增加，促进NK细胞及T细胞活性恢复。 表明人参皂苷可以通过调整垂体（ACTH）——肾上腺（皮质酮）轴的活动参与机体免疫功能的调节。 （13）TSPG对人早期造血生长因子IL-3基因表达的影响： ①研究方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），核酸分子原位杂交法。 ②实验结果： a.未经诱导的人T淋巴细胞株Jurkat细胞RNA提取物的RFPCR扩增产物只能够未见IL-3条带，而经TSPG诱导后则产生IL-3条带。 b.经TSPG诱导的胎儿胸腺细胞，脾细胞IL-3mRNA表达的阳性率及阳性强度均较对照组明显提高。 TSPG能诱导人淋巴细胞表达IL-3mRNA，从而促进早期血细胞发生。 3、开发与利用： （1）人参稀有皂苷的研究开发： 稀有人参皂苷包括人参皂苷Rh2、Rh1、Rh3、和Rg5等，它们只存在于红参和野山参中。 它们具有很高的生理活性，但在人参中的含量只有十万分之几，因此从人参中直接提取不符合实际。一般用酶法通过改变人参中二醇类皂苷的糖基，使之定向转化为人参稀有皂苷。 （2）人参皂苷的人工合成： 对人参皂苷的全合成石非常困难的，目前还没有相关报道。 国外有报道对Rh2用不同方法进行半合成，另外，对已阐明活性和结构的人参皂苷进行结构修饰语改造，以获得活性更强的化合物，同时可以改善人参皂苷的某些性质，增加其生物利用度 （3）发展趋势（自学） 二、红景天苷 地下块根及根茎入药，可提取红景天苷 1、主要有效化学成分： 红景天苷及其苷元，即对酪醇、黑蚁素、藏红花醛。 2、药理学作用： （1）对神经系统的作用 ①中枢神经抑制作用 ②双向调节作用 （2