日本血吸虫SjOST48基因的克隆、表达及其重组蛋白免疫.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 刘艳涛 等/ 日本血吸虫SjOST48 基因的克隆、表达及其重组蛋白免疫保护效果分析 501 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn April 25, 2015, 31(4): 501−511 DOI: 10.13345/j.cjb.140420 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 动物及兽医生物技术 SjOST48 1 1 1,2 1 1 1 1 1 1 1,3 刘艳涛 ，洪炀 ，张旻 ，韩倩 ，曹晓丹 ，李莎 ，陆珂 ，李浩 ，傅志强 ，林矫矫 1 200241 2 , 471023 3 225009 旻 , , , . SjOST48 . , 2015, 31(4): 501–511. Liu YT, Hong Y, Zhang M, et al. Cloning, expression of gene SjOST48 from Schistosoma japonicum and evaluation of the immunoprotective efficacy of rSjOST48 in mice. Chin J Biotech, 2015, 31(4): 501–511. 摘 要: 为了鉴定日本血吸虫SJCHGC01743 基因并评估其重组蛋白作为新的血吸虫病候选疫苗抗原的潜力， 利用PCR 技术扩增日本血吸虫SJCHGC01743 基因，应用荧光实时定量PCR 分析该基因在日本血吸虫不同发 育阶段虫体的转录水平，以pET-28a(+) 为载体构建重组表达质粒并诱导其在大肠杆菌中表达。将纯化的重组 蛋白免疫 BALB/c 小鼠制备免疫血清，利用Western blotting 检测重组蛋白的免疫原性，应用间接免疫荧光技 术对SJCHGC01743 进行蛋白组织定位，利用间接ELISA 方法检测小鼠血清中特异性抗体水平。将重组抗原免 疫小鼠，评估其免疫保护效果。PCR 扩增得到 1 248 bp 不含信号肽的cDNA 序列，同源性分析结果显示，该 基因为日本血吸虫寡糖转移酶OST48 亚基，命名为SjOST48 。实时定量PCR 分析显示SjOST48 在检测的童虫 和成虫各个期别虫体中均有转录，其中在28 d 虫体中的转录水平最高，在42 d 雌虫中的转录量显著高于雄虫。 构建的重组表达质粒 pET-28a(+)-SjOST48 成功在大肠杆菌中表达，重组蛋白 rSjOST48 分子量约 50 kDa 。 Western blotting 分析表明 rSjOST48 能被小鼠免疫血清识别，具有良好的免疫原性，间接免疫荧光实验表明 SjOST48 蛋白主要分布于虫体体被，少量分布于实质。ELISA 检测结果表明rSjOST48 能诱导产生较高的特异 性IgG 、IgG1 和IgG2a 抗体。动物免疫保护实验结果表明 SjOST48 能诱导小鼠产生32.62% (P0.05) 的减虫 率及57.61% (P0.01) 的肝脏减卵率。本研究为深入探讨日本血吸虫SjOST48 基因的生物学功能及筛选新的血 吸虫疫苗候选分子奠定了基础。 : 日本血吸虫，SjOST48 基因，表膜蛋白，免疫保护效果 Received: August 20, 2014; Accepted: October 29, 2014 Supported by: National Natural Science Foundation of China (Nos.. Corresponding author: Jiaojiao Lin. Tel: +86-21 E-mail: jjlin@ (Nos.