氯化钾注射液细菌内毒素检查方法探讨.docVIP

???? 氯化钾注射液细菌内毒素检查方法探讨 ???? ???? 摘要　本文用鲎试剂灵敏度的复核，确定其灵敏度，然后进行供试品的干扰实验和供试品的细菌内毒素检查。结果此种方法可信，并以家兔法作比较，结果一致。表明细菌内毒素检查法可提高热原检查的效率和灵敏度，对实际工作有一定价值。关键词　氯化钾注射液，细菌内毒素，鲎试剂 　　氯化钾注射液也是临床上的常用药之一，收载于中国药典1995年版二部［1］，并规定其热原检查采用家兔法，热原检查又是本药品的重要检查项。为此我们采用细菌内毒素检查法检测氯化钾注射液热原的可行性进行了研究，现将实验作以下报道。 1　实验材料 1.1　药品　氯化钾注射液：规格1 g／10 ml，泗水制药厂生产，鲎试剂（TAL）：灵敏度0.25 EU／ml，批号990824，规格0.1 ml／支，细菌内毒素工作标准品；批号990716，规格10 EU／支，细菌内毒素检查用水（BET）：批号981215，规格5 ml／支。以上均由湛江安度斯生物有限公司提供。细菌内毒素国家标准品，批号981，规格9000 EU／支，由中国药品生物制品检定所提供。1.2　动物　新西兰兔　由山东省动物实验中心提供 2　方法［2］与结果 2.1　鲎试剂（TAL）灵敏度的复核　　按中国药典1995年版二部1998增补本［3］规定方法进行灵敏度复核，将细菌内毒素国家标准品，用细菌内毒素检查用水1 ml先溶解，在旋涡混合器上混合15 min后，然后再用细菌内毒素检查用水稀释成2 λ、λ、1／2 λ及1／4 λ的系列溶液，即0.5、0.25、0.125、0.0625 EU．ml-1浓度的系列溶液，结果(见表1)。 表1　鲎试剂灵敏度复核 鲎试剂（TAL）（λ）＝0.25 EU．ml-1 内毒素浓度（EU．ml-1） 　 0.5 0.25 0.125 0.625 阴性对照 1＃ ＋ ＋ ＋ － － 2＃ ＋ ＋ ＋ － － 3＃ ＋ ＋ ＋ － － 4＃ ＋ ＋ ＋ － － 5＃ ＋ ＋ ＋ － － 　　本批鲎试剂灵敏度0.25 EU．ml-1，经复核灵敏度为0.125 EU．ml-1，在其标示值0.5～2 λ之间，符合中国药典规定。2.2　干扰试验2.2.1 内毒素理论限值（L）的确定，根据热原检查剂量计算出相应的限值（L)［4］，计算公式为：L＝K／M其中K为家兔和人的致热阈值（5 EU．kg-1），家兔注射剂量3 mg／ml，10 ml．kg-1来计算出氯化钾注射液的内毒素理论限值（L≤0.25 EU／1.5 mg）(或L≤1.25 EU／0.75 mg）。2.2.2 干扰试验［2］用细菌内毒素检查用水将热原检查合格的氯化钾注射液，稀释浓度为1.5 mg／ml和0.75 mg．ml-1的溶液分别溶解细菌内毒素，并稀释成每ml中含0.5、0.25、0.125、0.0625 EU．ml-1供试品溶液与相应的内毒素水溶液比较，细菌内毒素检查法规定［3］，如果两者的反应终点λ＝0.5～2.0之内，则认为本品在该浓度下对试验无干扰，反之则有干扰。结果(见表2)。 表2　氯化钾注射液干扰试验 鲎试剂（TAL） 灵敏度（λ）＝0.25EU．ml-1 样品稀释（MVD）0.25＝2(倍)4(倍) 类别 内毒素浓度（EU．ml-1） 　 0.5 0.25 0.125 0.0625 阴性对照 1.5 mg．ml-1 1＃ ＋ ＋ ＋ － － 供试品 2＃ ＋ ＋ ＋ － － 内毒素溶液 3＃ ＋ ＋ ＋ － － 　 4＃ ＋ ＋ ＋ － － 0.75 mg．ml-1 1＃ ＋ ＋ ＋ － － 供试品内 2＃ ＋ ＋ ＋ － － 毒素溶液 3＃ ＋ ＋ ＋ － － 　 4＃ ＋ ＋ ＋ － － 内毒素水 1＃ ＋ ＋ ＋ － － 溶液对照 2＃ ＋ ＋ ＋ － － 　 3＃ ＋ ＋ ＋ － － 　 4＃ ＋ ＋ ＋ － － 　　结果表明：1.5 mg．ml-1和0.75 mg．ml-1的供试品溶液均无干扰作用，在此试验的基础上，又检测了两个批号的样品，结果一致。2.2.3　细菌内毒素检查法与家兔法对比试验［2］，根据干扰试验的结果，我们对泗水制药厂生产氯化钾注射液批号980918 980919 980920进行了细菌内毒素检查法和家兔法的对比试验，首先计算出氯化钾注射液内毒素理论限值（L）使用鲎试剂（TAL）λ＝0.25 EU．ml-1，将氯化钾注射液用细菌内毒素检查用水稀释成1.5 mg．ml-1的溶液进行测定，同时做供试品阳性对照［3］结果(见表3)。 表3　细菌内毒素法与家兔法对比试验 样　　品 细菌内毒素法 家兔法 980918 (一) (一) 980919 (一) (一) 980920 (一) (一) 　　?*鲎试剂λ＝0.2