免疫亲和层析法快速纯化猪瘟病毒抗体.docVIP

猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus引起的一种高传染性疾病,死亡率高,严重影响养猪业发展。由于多种因素的影响,猪瘟疫苗质量不稳定,影响了猪瘟防治的效果[1]。另一方面,猪仔的母源抗体对疫苗免疫具有抑制作用[2-3]。有研究报道[4],通过口服或注射猪瘟抗体能够直接提高猪仔的免疫力,降低猪仔的发病率和死亡率。因此,低成本、快速纯化猪瘟抗体在猪瘟的诊断和防治中具有重要意义。 由于抗体制备方法、抗体生产、表达系统的多样性,使得抗体的分离纯化技术复杂多样。沉淀法和亲和层析、离子交换层析等方法均有应用[5]。本实验基于免疫亲和层析原理,将猪瘟病毒固定于惰性载体上作为配基,从高免疫猪血清中分离纯化猪瘟病毒抗体,旨在建立一种成本低、快速有效纯化猪瘟病毒抗体的方法。1.材料与方法 1.1细胞及病毒 猪传代肾细胞系PK-15由本课题组保存;猪瘟病毒由广东肇庆益信农业发展有限公司提供。 1.2主要试剂 HRP标记的兔抗猪lgG和脱脂奶粉购自Sigma 公司;Sepharose-4B和Sephadex G-75购自Amersham 公司;DMEM高糖培养基和胎牛血清等细胞培养试剂均购自广州斯佳生物科技有限公司;猪瘟病毒高免疫猪血清由广东肇庆益信农业发展有限公司提供;其他化学试剂均为分析纯或化学纯,购自广州化学有限公司。 1.3猪瘟病毒的培养及纯化 将PK-15细胞株复苏,在显微镜下观察细胞的生长情况,当细胞生长增殖至铺满单层后,进行细胞传代。待PK-15细胞长至70%~80%融合时,接种猪瘟病毒,37℃培养1h后,加入维持培养液,继续培养72h后取出,反复冻融3次,4℃,10000r/min 基金项目:暨南大学自然科学基金(109057;640073.作者单位:暨南大学生物工程学系(广州510632. 通讯作者:李任强,E-mail:trqli@ 【实验技术】 免疫亲和层析法快速纯化猪瘟病毒抗体 封琳王桂珍李阳李任强 【摘要】目的应用免疫亲和层析技术快速纯化猪瘟病毒抗体。方法将猪瘟病毒接种于猪传代肾细胞PK-15中培养,收获并纯化猪瘟病毒,将其与环氧氯丙烷活化的Sepharose-4B偶联,制备免疫亲和层析柱,从猪瘟病毒高免疫猪血清中纯化猪瘟病毒抗体,分别应用SDS和ELISA进行抗体纯度和活性检测。结果自制免疫亲和层析柱的偶联率为0.36mg抗原/g 载体;纯化的猪瘟病毒抗体纯度高,活性强,抗体回收率占猪血清总蛋白的2.45%。结论已建立了成本低、可快速有效纯化猪瘟病毒抗体的免疫亲和层析法。 【关键词】免疫亲和层析;猪瘟病毒;高免疫猪血清 【中国图书分类号】S852.65+1R392-33【文献标识码】A【文章编号】1004-5503(201110-1233-03 Rapid Purification of Antibody against Classical Swine Fever Virus by Im-munoaffinity Chromatography FENG Lin,WANG Gui-zhen,LI Yang,LI Ren-qiang(Department of Biotechnology,Jinan University,Guangzhou 510632,China 【Abstract】Objective To purify the antibody against classical swine fever virus by immunoaffinity chromatography.Methods Classical swine fever virus was inoculated to subcultured pig kidney PK-15cells and incubated.The harvested virus was purified and coupled with epichlorohydrin-activated Sepharose-4B to prepare immunoaffinity chromatographic column by which the antibody against classical swine fever virus was purified from hyperimmune sera of pigs and determined for purity and activity by SDSand ELISA respectively.Results The coupling rate of prepared immunoaffinity chromatography column was0.36mg antigen/g carrier. T