细胞生物学技术应用光电镜技术应用.pptVIP

X射线衍射技术（x-ray diffraction） 应用： 测定分子中原子的三维排列的唯一方法 原理及方法： * 制备结晶 * 选择波长 * 获得衍射图 * 计算和分析 4.核磁共振技术（NMR） 特点：测定蛋白质的液相 空间结构。 * 图示：普通双筒显微镜。比较高级的显微镜上都设有倾斜式的双目镜筒。在物镜转换器上方装有四个棱镜，使经过物镜的光线平分为两路到达目镜，故双筒显微镜的亮度要比单筒者为暗。双筒显微镜的优点为同时用两眼观察，有较强的立体感。 * ⑴一组滤光片：激发滤片和吸收滤片。⑵双色镜。 * 采用生物学、化学和物理学结合的方法，发明了一种荧光促进剂，激发诸如叶绿素等植物内部潜在的发光物质，让花朵自然产生荧光。 * 科研人员通过一种荧光促进剂来激发诸如叶绿素等玫瑰内部潜在的发光物质，让玫瑰花自然产生荧光。 * 载物台面积较大，在物镜上方，载物台上方有一个长焦距聚光器和照明光源，因此聚光器与载物台之间的工作距离提高可以放置培养皿、培养瓶等容器， 直接对培养的细胞进行观察。 * * * 离子溅射示意图 * 水有固态、液态、气态三中态相.根据热力学中的相平衡理论,随压力的降低,水的冰点变化不大,而沸点却越来越低,向冰点靠近.当压力降到一定的真空度时,水的沸点和冰点重合,冰就可以不经液态而直接汽化为气体,这一过程称为升华. * X-衍射技术并不涉及显微镜， 但是能够根据X-射线通过结晶样品形成的衍射样式成像。这一技术可用于在原子分辨的水平上推测分子的结构。实际上X-射线衍射技术是目前在原子水平上分析蛋白质、核酸和其他生物分子的惟一方法。Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型的主要依据之一就是根据Franklin对DNA晶体衍射的结果。 电镜三维重建技术 2.扫描电子显微镜 成像原理 扫描电镜的成像原理 阴极钨丝加热后产生的电子束经过栅极和阳极加速和会聚，再经二级聚光镜及物镜会聚形成具有一定能量、一定束流强度和束斑直径的微细电子束； 电子束在扫描线圈驱动下，在试样表面按一定时间、空间顺序作栅网式扫描。聚焦电子束与试样相互作用，产生二次电子发射。二次电子发射量随试样表面形貌而变化； 二次电子信号被收集、转换、放大，在电视荧光屏上同步扫描成像。 a.样品表面形貌 表面越突出，图像越亮 表面越凹陷，图像越暗 b.样品与集电器的关系 面向集电器，图像越亮 背向集电器，图像越暗 A .原理 二次电子 B .分辨率 3-10nm C .样品的制备 * 固定 * 干燥 （临界点干燥） * 染色 （离子溅射镀膜） D. 应用 标本表面的三维结构 临界点干燥的原理 当温度、压力达到一定的数值时，气体的密度可增大到与液态一样，此时气相与液相的界面消失，液体的表面张力亦会随之消失，这种情况称为临界状态。 临界点干燥：利用物质在临界状态下液体表面张力被消除的特性，克服样品干燥过程中的变形，保持样品原状，达到干燥的目的。 离子溅射示意图 在低真空系统通入一些惰性气体氩、氖、氮等，两极间 施加电场后即产生辉光放电。 气体电离产生的阳离子轰击阴极的金属靶，使金属原 子溅射出来，在电场的加速下飞向样品，由于在前进中不 断地与惰性气体分子碰撞，改变方向，致使金属原子弥漫 均匀地沉积在样品表面。 ★注意：为了防止样品表面受损，并获得更牢固 和均匀的金属镀膜，可在溅射金属前先 溅射一层碳。 ★判断镀膜厚度最简单的方法：将一小块白色瓷片放入镀膜仪的近样品处，瓷片中心滴一小滴硅油，当瓷片上无油区出现淡淡的茶色时，镀膜厚度约为10nm。瓷片中心硅油区仍保持白色便于与周围茶色形成对比以利于判断。 扫描电镜的特点 高的分辨率 很强的立体感 放大倍率范围广 针 尖 细 菌 样 品 适 应 性 大 应用范围广 样品制备简单 * 取材、清洗 * 固定 * 干燥 * 镀膜 无需进行透射电镜中超薄切片制作及染色 的相关步骤。 3.透射电镜样品提高反差的方法 ⑴负染法 ⑵金属投影法 两个应用特例 冰冻断裂 冰冻蚀刻 负 染 法 原理：用只沉积于样品周围的、比样品密度高的物质(如磷钨酸)对样品进行染色，使样品和背景形成显著的明暗对比,这种染背景而不染样品的方法叫负染。 应用：适用于颗粒或纤维等游离的样品。特别是在病毒性致病因子的超微病理诊断中广泛应用。 发展史 1955年，