代谢控制发酵基本的思想.ppt

2－11 目的产物的生物合成从别的终产物开始时，除解除目的产物自身合成的反馈抑制外，也应设法解除对其前体物合成的调节。 举例：Ile生产菌株，Thr为其前体物，应同时解除这两种终产物的反馈抑制。 利用基因工程技术，将生物合成途径中的关键酶基因克隆到多拷贝载体上，使其大量扩增，增加前体物的合成。 四、细胞膜组分缺失突变株，去除终产物的积累 图2－12 五、特殊调节机制的利用 例如谷氨酸棒杆菌的Asp族氨基酸合成代谢途径中 2－13 的变换 Thr优先合成，添加蛋氨酸，降低 HD活性，可积累Lys。 HD 2－14 2－15 3、多种产物控制机制的利用 依据协同反馈抑制或合作抑制的机理，设法控制目的产物外的终产物以外的终产物的供给量，使目的产物积累。 如：Lys发酵：选育丧失HD（高斯氨酸脱氢酶）或HK（高斯氨酸激酶）的突变株，限量添加Thr，解除Lys和Thr对共用酶AK的协同反馈抑制，达到Lys积累的目的。 六、条件突变株的应用 1、条件致死突变 如温度敏感性突变、抑制性突变、链霉素依赖型突变和低温敏感性突变等，因环境条件不同能显示野生型特性又能显示突变型特性的突变。 2、温度敏感性突变株 在低温下生长，而在高温下不能生长繁殖的突变株。 该突变株在高温下是一种营养缺陷型。（酶受热失活） 应用：温度敏感型突变株生产Glu，通过提高温度，可在富有生物素的培养基中高产Glu，无须添加其他的化学控制。 七、选育不生成副产物的菌株 除突破微生物原来的代谢调节外，附加如下突变： 有共用前体的其他分支途径或目的产物是其他产物的前体物时，应附加营养缺陷型，切断支路或目的产物向其他产物的代谢流。 选育丧失目的产物分解酶的突变株，阻止目的产物分解。 有副产物时，设法切断副产物的代谢流。 缺乏降解产物酶的突变株 图2－16 NTG 菌株在保存与使用中，要防止菌种变异； 发酵过程中，培养基的组成及培养条件需要进行最优化控制； 发酵结束后，应采用经济合理的提取方法，从发酵液中分离精制目的产物，以确保高产。 (四) 葡萄糖对细胞内cAMP水平的调节 （1）可能是由于葡萄糖分解过程中的某些中间产物抑制了细胞内cAMP的形成。 （2）可能是这种中间产物激活了cAMP的分解。 （五）分解代谢阻遏的分子机制 图2－8 分解代谢物阻遏的分子水平机制 （六）分解代谢物阻遏作用的克服 1、生产培养基内不使用阻遏性碳源，将有利于对分解代谢物阻遏敏感酶的生产。 2、可利用一种不能代谢的诱导物的类似物，或缓慢补入诱导物或使用只能缓慢代谢的诱导物的衍生物来增加酶的生产。 3、选育耐（抗）分解代谢阻遏的突变株 。 五、 反馈抑制和反馈阻遏 1、反馈抑制和阻遏的概念 反馈抑制（feedback inhibition）：是指代谢途径的终产物对催化该途径中的一个反应（通常是第一个反应）的酶活力的抑制，其实质是终产物结合到酶的变构部位，从而干扰酶和它底物的结合，当然与此相反为酶活性的激活。 反馈阻遏（feedback repression）：是指终产物（或终产物的结构类似物）阻止催化该途径的一个或几个反应中的一个或几个酶的合成，其实质是调节基因的作用，这是微生物不通过基因突变而适应于环境改变的一种措施，当然与此相反有酶合成的诱导。 2、反馈抑制与反馈阻遏的比较 反馈抑制或激活，不涉及到蛋白质（酶）合成过程，比较直接而快、当终产物浓度或底物浓度达到一定水平时，即使酶活性暂时丧失（或提高），待最终产物的浓度降低（或底物耗尽）后，酶活力又重新恢复（或降低）。 反馈阻遏（诱导）是对酶合成的阻遏（促进）所以其效果不如反馈抑制那样迅速，但可以节约原料，对微生物来说是经济的 。 六、代谢产物分泌的控制 （二）改变细胞壁结构来提高膜透性 抗生素阻遏肽聚糖合成，从而使细胞壁合成受阻，形成不完全的细胞壁，由于细胞内外渗透压的作用，使细胞膜受损伤改善膜的透性。 第二节 代谢控制发酵的基本思想 微生物在正常情况下，通过细胞内自我调节，维持各个代谢途径的相互协调，使其代谢产物既不少又不会过多的积累，而人类利用微生物进行发酵则需要微生物积累较多的代谢产物，为此对微生物的代谢必须进行人工控制 。 人工控制微生物代谢的方法主要有两种： 一、改变微生物的遗传特征 二、控制发酵条件 一、切断支路代谢 营养缺陷型 原菌株由于发生基因突变，致使合成途径中某一步骤发生缺陷，从而丧失了合成某些物质的能力，必须在培养基中外源补加该营养物质才能生长的突变型菌株。 表示：Ade－（腺嘌呤缺陷型）。 图2-9　谷氨酸棒杆菌鸟氨酸生物合成途径 ①乙酰谷氨酸合成酶 ②