用噬菌体随机肽库分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) N蛋白单克隆抗体识别的表位.docVIP

农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2004,12(2):175~178 ·研究论文· （PRRSV）用噬菌体随机肽库分析猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白单克隆抗体识别的表位* 王玉娥杨汉春**郭 鑫陈艳红查振林 北京100094）（中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室， 摘要:利用噬菌体随机7肽库分析猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）N蛋白B细胞抗原表位。以PRRSVBJ-4株N蛋白的单克隆抗体(mAb)GE3作为筛选分子，筛选噬菌体展示的随机7肽库。经序列测定和分子生物学软件分析，表明噬菌体展示的外源氨基酸序列与PRRSVBJ-4株N蛋白的50~55aa的氨基酸序列有极高的同源性。ELISA分析结果表明,筛选到的噬菌体能特异性地与PRRSV阳性血清结合，从而证实了该表位是单克隆抗体GE3所识别的抗原表位。 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)；噬菌体随机肽库；表位 IdentificationoftheEpitopeofPRRSVNProteinMonoclonalAntibody withPhageDisplayedRandomPeptideLibrary WANGYu-EYANGHan-Chun**GUOXinCHENYan-HongCHAZhen-Lin (KeylaboratoryofPreventiveVeterinaryMedicine,MinistryofAgriculture，ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094,China) Phagedisplaytechnologyhasbeenusedsuccessfullytoidentifyshortpeptidesthatbindtotargetmoleculessuchas monoclonalantibody(mAb),polyclonalantibodyandothermolecules.InordertogettheepitopeidentifiedbyPRRSVBJ-4mAbGE3,aphagerandomheptapeptidelibrarywasbiopannedwithGE3.Afterthreeroundsofscreening-washing-enriching,8phagesweresequenced,and7cloneshadaconsensussequence,PEKPHF.BycomparingthesesequenceswithPRRSVnucleocapsidprotein,theepitopesitewaslocatedattheresidue50~55aaofPRRSVNprotein.AndtheresultsofmolecularbiologysoftwareanalysisandELISAsuggestedthattheepitopewasright.TheseresultsdemonstratedthatthesequencesweretheepitopeofNproteinofPRRSVBJ-4isolate . porcinereproductiveandrespiratorysyndrome virus;phagerandompeptidelibrary;epitope 猪繁殖与呼吸综合征（porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS）是规模化养猪场引发繁殖呼吸障碍的主要疫病之一，严重威胁了养猪业的发展[1~3]，病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV）。该病毒属于套式病毒目（Nidovirales），动 （Arterivirus）脉炎病毒科,与其同属的还有马动脉炎 病毒（EAV），乳酸脱氢增高症病毒（LDV），猴出血 （SHFV）热病毒。PRRSV基因组全长约15kb，包括 王玉娥：女，1974年生，博士研究生。 9个开放阅读框（ORF），分别编码RNA依赖的 RNA聚合酶（RdRp）（ORF1a和ORF1b）和7个结构 [4,5] （ORF2a、蛋白ORF2b、ORFs3-7）。ORF5编码主要的囊膜糖蛋白GP5，ORFs2-4分别编码次要结构蛋白GP2a、GP2b、GP3和GP4，GP5与ORF6编码的基质蛋白M形成二聚体，核衣壳蛋白N由ORF7编码。 猪繁殖与呼吸综合征病毒的N蛋白是其主要结构蛋白，抗原性最强。PRRSV感染后机体首先产生的是针对N蛋白抗体，并且在体内持续时间最长[6]，因而该蛋白已被作为检测PRRSV血清抗体的诊 *基金项目:北京