基因功能分析和基本策略-硕士.pptVIP

基因功能分析的基本策略 第一节 转基因技术transgenic technology 电击法 在外加电场的作用下，细胞膜电位发生改变，细胞质膜瞬间出现可逆性的电穿孔，从而使一定数量的外源DNA从细胞外扩散到细胞质和细胞核内，并进一步整合到宿主DNA上，达到转基因目的。 显微注射法 将外源DNA在显微操作系统的辅助下，直接将外源DNA注入哺乳动物受精卵的原核内，使外源基因整合到基因组上，制备转基因动物。 基因枪法 将要转染的DNA吸附到高黏度的金属颗粒上，在加速装置的作用下，将这些粒子高速打入细胞或组织内，达到转基因目的。 磷酸钙法 将待转染的DNA溶解在磷酸缓冲液中，使DNA片段与磷酸钙共沉淀并形成大的颗粒；加入贴壁培养的细胞中被吸收，实现转基因。 第二节 RNA干扰技术RNA Interference (RNAi) RNAi实例(载体法)： Target gene：c-myc 查找靶基因mRNA 利用网络在线支持，寻找siRNA序列 根据查找的siRNA序列，合成长链oligo 构建载体 转染 检测效应（包括干扰效应和生物学效应） 2、/  3、其它网站 载体构建： dsDNA形成：退火  载体的酶切和回收