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色谱定量分析基础 峰处理参数 去除高频噪声 数据采集速度，WIDTH/10采一次数据 控制S.TEST时间，斜率测试时间为10×WIDTH 注：填充柱，峰宽：5 S 毛细柱，峰宽：2～3 S 峰处理参数 判断峰起点 滤除低平噪声（如蛇行等） SLOPE的确定：通过S.TEST进行，测定时间为10倍 WIDTH的时间。 峰处理参数 峰处理参数 设定值为0时，积分仪自动判断； 不使用时可设为1000。 积分峰标记（MK） E：超量程峰 S：拖尾峰（一般指溶剂峰） T：尾上峰，作过拖尾处理的峰 V：与前邻峰垂直分割 L：前沿峰 定性参数 保留时间允许误差： 时间窗（window%） ，相对法 设定简单，但所测组分保留时间跨度大时，不易设定 时间带（band），绝对法 设定较繁，需逐一设定 示例：时间窗法，设定window=5%，某组分Rt=8.0 min，则该组分保留时间允许范围为：8.0±8.0×5% min 时间带法，设定band=0.2min，某组分Rt=8.0 min，则该组分保留时间允许范围为：8.0±0.2 min 定量参数 校正点别（曲线计算方法） 单点校正（linear) 两点校正（linear) 多点校正 线性回归 点到点连线（折线） 二次曲线 三次曲线 单点校正 对每一组分仅做一点校正（可以是多次分析同一浓度的标样，取其平均值） 标样浓度应尽可能接近实际样品中各组分的浓度 单点校正曲线必须通过原点 多点校正 对每一组分两个或两个以上不同浓度水平的校正 当组分响应值随浓度变化而呈非线性变化时须使用多点校正 校正曲线可以不通过原点 定量参数 面积归一化法 校正面积归一化法 外标法 内标法 面积归一化法 公式： 校正面积归一化法 公式： 式中：Fi为校正因子， Fi＝浓度（含量）/面积 外标法 公式： 内标法 公式： 内标法 样品中无该组分 色谱性质稳定 化学性质与所测组分相似 不会与样品发生反应 内标物浓度应适当，峰面积比值在0.7～1.3范围内 HPLC Business Dept Shimadzu Corporation 分析方法（仪器参数） 仪器参数 选择分析系统（进样方式、色谱柱、检测器） 设定分离条件（载气流量、分流比、温度条件） 检测器参数（量程、极性、电流） 分析方法（数据处理参数） 峰处理参数（WIDTH, SLOPE, DRIFT, T.DBL等） 定量参数 定量方法： 内标法、外标法、面积归一法等 工作曲线的制作 ※ 曲线点数：一点、两点及多点 ※ 曲线计算：线性回归、折线、二次曲线、三次曲线 定性参数：保留时间及允许误差（时间窗，时间带） WIDTH：半高峰宽，用于： 峰 宽 SLOPE：10倍Width的所有信号的总和，用于： 斜率增加时，峰检测灵敏度降低； 斜率值降低时，峰检测灵敏度提高 斜 率 DRIFT：判断相邻峰的积分方式 注：1）设定值为0时，积分仪将自动判断 2）如DRIFT与基线至峰谷连线较接近时，积分将 不稳定，导致面积值变化较大，需加以注意。 DRIFT DRIFT DRIFT DRIFT DRIFT DRIFT 漂 移 T.DBL：峰展宽一倍所需要的时间 举例：T.DBL＝10min，则 Rt＝10min时，峰宽变为2×WIDTH， 斜率变为SLOPE/2 Rt＝20min时，峰宽变为4×WIDTH， 斜率变为SLOPE/4 T.DBL 2 x T.DBL 4 x T.DBL WIDTH SLOPE 2WIDTH SLOPE/2 4WIDTH SLOPE/4 8WIDTH SLOPE/8 变参时间 标记： 单点校正 多点校正 校正方法 优点： 1）无需做校正，简便，快速 2）进样量不严格要求 缺点： 1）所有组分都流出且被检测到 2）所有组分的检测灵敏度都相同 优点： 进样量不严格要求 缺点： 1）所有组分都流出且被检测到 2）所有组分都需作校正 优点： 1）不需所有峰都流出或被检测到 2）只对所测组分作校正 3）可以校正检测器的非线性响应 缺点： 1）进样量必须准确 2）仪器必须有良好的稳定性 优点： 1）进样量不严格要求 2）只对所测组分作校正 3）可以校正检测器的非线性响应 缺点： 1）必须在样品中加一内标组分 2）操作较为繁琐 选择内标物的标准： HPLC Business Dept Sh