第六章天然药物化学黄酮类化合物.pptVIP

3．炭粉吸附法 适用于苷类的精制工作。 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。 依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇洗脱，分步收集、检查、合并。 大部分苷类可用7%酚/水洗下，经减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。 4. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝胶分子筛分离 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小?大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大?小洗脱。 总的洗脱顺序： 糖多的苷?糖少的苷?游离苷元（极性小?大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 　　　　　　 ②醇及含水醇 　　　　　　 ③含水丙酮，甲醇－氯仿 第四节 鉴定 目前主要采用的方法有： ①与标准品或与文献对照PPC或TLC得到的Rf值　 ②分析对比样品在甲醇溶液中及加入酸、碱或金属盐类试剂后得到的UV光谱 1. 硅胶薄层色谱(TLC) 用于弱极性黄酮较好。 展开剂：常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）； 苯：甲醇（95：5）或苯：甲醇：冰醋酸（35：5：5）等。 ２. 聚酰胺薄层色谱 适用范围广，可分离含游离酚羟基的黄酮或其苷类。 常用展开系统：乙醇:水（3:2）；丙酮:水（1:1）等。 显色剂：紫外光；2%三氯化铝甲醇液；1%FeCl3 / 1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液。 二、纸色谱 适合分离鉴定包括苷和苷元的各种黄酮类化合物 苷类成分可采用双向纸色谱法，第一相展开采用醇性溶剂，如BAW系统（正丁醇：醋酸：水4：1：5上层）；第二相展开用水性溶剂，如氯仿：醋酸：水（3：6：1） 苷元则多采用醇性溶剂。 花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。 Rf值与结构之间的关系： 1、醇性展开剂 （1）苷元单糖苷双糖苷 （2）分子中 羟基数目增多，极性增强， Rf值相应减小，羟基甲基化后，极性降低， Rf值增大 2、水性展开剂 （1）双糖苷单糖苷苷元。苷元几乎留于原点， 苷类Rf值可在0.5以上，且糖链越长，则Rf值越大 （2）平面型黄酮苷元几乎原点不同，非平面型黄酮苷元因亲水性较强， Rf值较大 显色： （1）日光下观察 （2）紫外灯下观察荧光 （3）显色剂显色 常用显色剂：1%三氯化铝甲醇溶液，氨熏、10%碳酸钠水溶液等 一、紫外-可见光谱 可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有羟基。 一般程序： ①测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型； ②在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测UV谱和可见光谱以了解3,5,7,3’,4’有无羟基及邻二酚羟基； ③苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。 第五节 结构测定 （一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱 多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成： 带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰基系统的电子跃迁所引起； 带II在220-280nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃迁所引起。 根据带I、带II的峰位及形状（或强度），推测黄酮类化合物结构类型。 ? 带II(240-285nm)（苯甲酰系统） 带I(300-400nm) 桂皮酰系统 类 型 说 明 ? ? 240-280 304-350 黄酮类 ? ① -OH越多，带I带II越红移 ? ② 带II峰位主要受A环氧取代程度的影响， B环3’,4’有-OH基，带II为双峰（主峰伴肩峰） 328-357 黄酮醇类 (3-OR) ? 352-385 黄酮醇类 (3-OH) ? 245-270 270-295 300-400 异黄酮类 二氢黄酮（醇） B环上有-OH, OCH3对带I影响不大 ? 220-270 340-390 或340-390(Ia) 300-320(Ib) 查耳酮类 查耳酮2’-OH使带I向红移影响大 370-430(3-4个小峰) 橙酮类 ? 不同类型黄酮类化合物的紫外光谱 2．加入诊断试剂后引起的位移及结构测定 加入试剂 带II 带I 说明 样品+MeOH 220-285 300-400 两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基(-OH, -OCH3)有关，-OH, -OCH3越多，越长移 ? ? ? +NaOMe 或+NaOH A环有-OH，红移小，无意义 红移?40-60nm（?不变或增强） 红移?50-60nm（?下降） 有4’-OH