高密度脂蛋白HDL-CHOL测定标准操作程序SOP文件.docVIP

ABCD医院 生化实验室 文件编号： ABCD-SOP-04-33 HDL-CHOL测定 版序：ABCD 页码：第1 页，共4 页 1 测定方法 均相酶比色法。 2 测定原理 在弱碱缓冲液及氯化镁的介质环境中，标本中的VLDL/LDL/CM等成分与硫酸-a-环糊精及硫酸葡聚糖形成不能被PEG修饰的酶催化的水溶性复合物。使此类成分不需要再沉淀除去。 然后加入PEG修饰的胆固醇酯酶及胆固醇氧化酶： HDL-胆固醇酯+ H2O PEG胆固醇酯酶 胆固醇 + 脂肪酸 胆固醇酯被破坏，定量的形成游离脂肪酸及游离胆固醇 胆固醇 + O2 PEG胆固醇氧化酶 4 胆甾烯醇 + H2O2 在加入氧后，胆固醇被氧化 2H2O2 + 4-氨基安替比林 + HSDA* + H+ + H2O 过氧化物酶 5 H2O + 蓝紫色的醌亚胺 产生颜色的深度与HDL浓度成正比，从而使HDL浓度得以检测。 本方法需要带PEG修饰的酶，硫酸-α-环糊精，硫酸葡聚糖。当胆固醇酯酶或胆固醇氧化酶被PEG修饰后，他们表现出对脂蛋白不同片断的选择性的催化活性。其顺序为：LDLVLDL 乳糜颗粒HDL。 在反应体系中加入镁离子以及硫酸-α-环糊精可以降低胆固醇的反应性，尤其是乳糜微粒以及极低密度脂蛋白，不需要再沉淀除去。 非禁食的标本比较禁食的标本结果会轻微降低。 罗氏HDL直接检测法符合1998NIH/NCEP的要求，并且与沉淀法及超速离心法相关良好。 3 标本 血清或肝素抗凝血浆，处理方法见标本处理程序。 稳定性：-70℃ 2－8℃ 4 试剂 4.1试剂 来源：ROCHE配套 试剂（详见试剂说明书）。 贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃ R1：打开后机上稳定28天 R2：打开后机上稳定28天 准备：直接使用。 ABCD医院 生化实验室 文件编号： ABCD-SOP-04-33 HDL-CHOL测定 版序：ABCD 页码：第2 页，共4 页 4.2 校准物 来源：ROCHE配套校准物,具体如下： S1：0.9％的NaCl S2： c.f.a.s HDL/LDL 贮存条件：校准物在2-8℃ 准备:直接使用。 定标频率：A试剂批号更换后进行2点定标 B 由质控结果决定 4.3 质控物 来源：Precinorm HDL/LDL(罗氏脂类正常值质控) Precipath HDL/LDL (罗氏脂类病理值质控) 其它适合的质控品 贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。 准备：直接使用。 质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。 5 仪器 ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。 6 上机操作 见仪器作业指导书，参数设置见附表。 7 参考范围 没风险 中度风险 高风险 男性 Mg/dl 55 35-55 35 Mmol/l 1.45 0.90-1.45 0.90 女性 Mg/dl 65 45-65 45 Mmol/l 1.68 1.15-1.68 1.15 换算关系式：mg/dl × 0.026 = mmol/l mmol/l × 38.66 = mg/dl ABCD医院 生化实验室 文件编号： ABCD-SOP-04-33 HDL-CHOL测定 版序：ABCD 页码：第3 页，共4 页 8 性能指标 本法线性范围为3-120mg/dl，不准确度允许范围±30%，不精密度CV=2.6%，灵敏度为3mg/dl。 9 注意事项 9.1 血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。 9.2 EDTA抗凝会造成结果偏低。 9.3仅应用于体外诊断。 9.4扔弃废物应符合当地的法规。 10抗干扰能力： 为了避免探针和比色杯于白蛋白，脂蛋白，铜蓝氮白等的干扰，应该使用SMS酸性洗液进行清洗。 10.1标准：回收率在90％－110％之间。 10.2黄疸：黄胆指数达到46时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为46mg/dl） 10.3溶血：溶血指数达到1000时不会有明显干扰。（血红素浓度约为1000mg/dl） 10.4脂血：乳糜指数达到1000明显干扰。（甘油三酯浓度约为2000mg/dl） 11 临床意义 高密度脂蛋白负责将外周组织中的胆固醇反转运入肝脏。然后，胆固醇转化为胆汁酸，通过胆道进入肠道。因为HDL的浓度与动脉硬化综合症的发病率有相关，所以监测血清中的高密度胆固醇的浓度非常重要。高浓度的HDL有助于防止罹患冠心病，而HDL浓度降低，