HPLC柱前衍生测定保健食品中牛磺酸含量.docVIP

[作者简介]　万玉萍(1967- , 女, 大学本科, 副主任技师, 主要 从事理化检验工作。 【化学测定方法】 HPLC 柱前衍生测定保健食品中牛磺酸含量 万玉萍, 段志敏, 林　佶, 卿雪琴 (云南省疾病预防控制中心, 昆明　650022 [摘要]　目的:建立高效液相色谱法测定保健食品中牛磺酸含量的测定方法。方法:采用Z ORBAX Bonus -RP 色谱柱(5μm, 416mm ×150mm , 以甲醇+水=20+80为流动相, 流速110m l/min, 波长330n m, 柱温为25℃, 在柱前进行衍 生反应后直接进样。结果:线性范围:3013～25210ng, r =019997(n =8 。加标回收率9813%～10117%。最低检测限 (S:N =3 为411ng 。最低定量限(S:N =10 为1317ng 。结论:本法测定条件下所用色谱柱对测定组分专一性较好, 简便快速, 定量准确, 灵敏度高, 重现性好, 适用于保健食品中牛磺酸的测定, 可作为产品的质量控制方法。[关键词]　高效液相色谱法; 柱前衍生; 牛磺酸含量 [中图分类号]　O65717+ 2　　　　[文献标识码]　A 　　　　[文章编号]　1004-8685(2006 10-1201-02　　牛磺酸又称牛胆酸, 其化学名称为2-氨基乙磺酸。牛黄酸为机体内源性氨基酸, 普遍存在人体内, 主要维持人体机能的正常运作与平衡, 维护各器官的生长发育, 提高自身免疫功能, 对人体健康, 特别是婴儿的正常发育起着十分重要作用。由于牛磺酸是人体必不可少的氨基酸, 现不足时, , 添加于乳制品、饮料、, 作为食品营养强化剂, , 其营养价值接近母乳, 对婴幼儿有益智、强身作用。无论哪一类营养素, 多么有营养价值, 在人体内的量都是有一定限度的, 过多了就会影响到其他营养素之间的平衡; 营养素之间的平衡被打乱了, 就会影响某些营养素的吸收利用, 而每个营养素对人体的益处都是不可代替的, 都是惟一的。所以, 在补充营养素时, 不能顾此失彼。由于牛磺酸的重要性和广泛的应用, 为了更好地控制产品质量, 本文对保健食品中牛磺酸含量的高效液相色谱测定方法进行了研究, 现将研究结果报告如下。 1　材料与方法111　仪器与试剂 Agilent 1100高效液相色谱仪, 带柱前衍生装置; Agilent 1100色谱工作站; 二极管阵列检测器; 甲醇为色谱纯试剂; 标 准品牛磺酸(99% 为SI G MA 公司提供; 邻苯二甲醛(OP A , 分析纯; 硼酸, 分析纯; 氢氧化钠, 分析纯; 乙硫醇, 色谱纯; 所有试剂及样品进柱前均过0145μm 滤膜, 实验用水为1812M Ω?c m 的纯水。112　色谱条件 采用Z ORBAX Bonus -RP 色谱柱(5μm, 416mm × 150mm , 以甲醇+水=20+80为流动相; 流速:110m l/min; 波长:330nm; 柱温:25℃。113　溶液的制备 11311　02148g 硼酸和1141g , m 。 11　称取011g OP A 用10m l 甲醇溶解, 乙硫醇, 用014mol/L硼酸钠缓冲液定容至100m l 。 11313　标准溶液的制备　精密称取牛磺酸(99% 010509g 置于50m l 容量瓶中, 用水溶解并定容至刻度, 此溶液浓度为 110078mg/ml, 临用时用水稀释成含牛磺酸010202mg/ml 和011008mg/ml 的标准使用液。 11314　样品溶液的制备　精密称取样品110g, 加水溶解并 定容至100m l, 用滤纸进行粗滤后过0145μm 微孔滤膜, 滤液待上机用。 114　实验步骤 11411　标准曲线溶液的配制　取010202mg/ml 的标准溶液310, 410, 510m l 分别加水至510m l, 再取011008mg/ml 的标 准溶液210, 310, 410, 510m l 分别加水至510m l, 此时溶液浓度分别为0101212, 0101616, 0102020, 0104032, 0106048, 0108064, 011008mg/ml 。当进样为215μl 时, 其进样量分别 为:3013, 4014, 5015, 10018, 15112, 20116, 25210ng 。 11412　柱前衍生　用自动进样器设定柱前衍生条件, 吸取11411制备好的标准溶液215μl, 再吸取215μl 衍生剂, 于柱 前混合4次, 等待2m in, 立刻进样。取11314制备好的样品溶液215μl 及215μl 衍生剂, 与测定标准溶液时进行同样的操作。 11413　样品根据标准溶液牛磺酸出峰的保留时间定性, 外标 峰面积法定量。 2　结果与