植物细胞骨架的观察.docVIP

实验八 植物细胞骨架的光学显微镜观察 实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。 实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮兰R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。 实验试剂： 1、M-缓冲液； 2、pH6.8磷酸缓冲液； 3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制； 4、0.2%考马斯亮兰R250； 5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液； 实验步骤： 撕取洋葱鳞茎内表皮细胞（约1cm2大小若干片）置于装有pH6.8磷酸缓冲液的50ml 吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20-30min； 吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次8min； 3%戊二醛固定30min； pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次8min； 0.2%考马斯亮兰R250染色20min； 用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺子载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。 实验作业： 绘制你所观察到的植物细胞骨架图象； 戊二醛、考马斯亮兰R250、TritonX-100是什么？在本实验中各起什么作用？