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PAGE PAGE 8 微生物学中的一些问题 第2章纯培养 1.冷冻真空干燥保藏、液氮保藏法是目前使用最普遍、最重要的微生物保藏方法，大多数专业的菌种保藏机构均采用这两种方法作为主要的微生物保存手段。（ T ） 2.如果要从环境中分离得到能利用对氨基苯乙酸/以2，4-D作为唯一碳源和能源的微生物纯培养物，你该如何设计实验？ 从对氨基苯乙酸/2，4-D含量较高的环境中采集土样或水样; 配制仅以对氨基苯乙酸//2，4-D作为唯一碳源培养基，进行增殖培养; 配制培养基，制备平板，一种仅以对氨基苯乙酸/2，4-D作为唯一碳源(A)，另一种不含任何碳源作为对照(B) ; 将样品适当稀释(十倍稀释法)，涂布A平板;将平板置于适当温度条件下培养，观察是否有菌落产生; 将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板，置于相同温度条件下培养(在B平板上生长的菌落是可利用空气中CO2的自养型微生物) ; 挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可利用对氨基苯乙酸/2，4-D作为碳源和能源的微生物纯培养物。 第3章结构 1．革兰氏阳性细菌细胞壁的肽聚糖单体由（1）双糖单位 （2）四肽尾 （3）肽间桥三部分组成。 2.大肠杆菌与金黄色葡萄球菌在细胞壁的组成与结构上的差别. 组成上的差别：大肠杆菌（革兰氏阴性菌）：肽聚糖含量低；无磷壁酸；类脂质含量高；蛋白质含量高。金黄色葡萄球菌（革兰氏阳性菌）：肽聚糖含量很高；磷壁酸含量很高；无类脂质；无蛋白质。 结构差别：大肠杆菌：肽聚糖：四肽尾是“L丙氨酸—D谷氨酸—L赖氨酸—D丙氨酸” ）；甘氨酸五肽桥；厚度大；交联度大。金黄色葡萄球菌：四肽尾是“L丙氨酸—D谷氨酸—mDPA—D丙氨酸”；无特殊肽桥；厚度小；交联度小。 3.肽聚糖种类的多样性主要反映在_A_结构的多样性上。 A肽桥 B粘肽 C双糖单位 D四肽尾 4. 革兰氏染色法的分子机制是什么，基本操作步骤，哪一步是关键步骤；G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色 革兰氏染色法的操作步骤：第一步：结晶紫初染；第二步：碘液媒染；第三步：酒精脱色;第四步：沙黄复染。其中关键步骤：酒精脱色。 5.溶菌酶与青霉素对细菌细胞壁作用的异同:溶菌酶主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。水解肽聚糖双糖单位中的β－1，4－糖苷键，导致细菌因细胞壁肽聚糖的“散架”而死亡。青霉素抑制繁殖期细菌细胞壁的合成而发挥杀菌作用，起效迅速。作用于肽聚糖肽桥的联结，即抑制肽聚糖的合成，故仅对生长着的菌有效，主要是G+菌。 6.磷壁酸只在G+细菌的细胞壁上存在，而LPS则仅在G-细菌的细胞壁上存在。（T ） 7.缺壁细菌主要有：L型细菌、支原体、原生质体、球状体。 8.芽孢:某些微生物在其生长发育后期于胞内形成的一个圆形或椭圆形、厚壁、抗逆性极强的休眠体。 9.芽孢是产芽孢细菌的繁殖器官。（F ） 10.芽孢核心由3层结构紧紧包裹着，由内向外分别是：皮层、芽孢衣和孢外壁。 11.伴胞晶体: 少数芽孢杆菌在其形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体-内毒素，称为伴胞晶体 12.试从芽孢结构出发分析芽孢抗性强的原因，并用渗透调节皮层膨胀学说说明芽孢的耐热机制。 .芽孢的外壁层厚而致密，主要成分为脂蛋白，通透性差,不易着色。 核心含有大量的DNA、RNA、蛋白质酶等物质，还含有2,6—吡啶二羧酸（DPA）,DPA是芽孢特有的成分。一般以 DPA—Ca的形式存在。 皮层主要含芽孢肽聚糖、 DPA—Ca，皮层体积大，比较致密。芽孢平均含水量低,约40%。 渗透调节皮层膨胀学说认为芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，而皮层含有大量交联度低、负电荷强的芽孢肽聚糖，它与低价阳离子一起赋予皮层高渗透压的特性去夺取芽孢核心的水分，结果造成皮层的充分膨胀，而核心部分的细胞质高度失水。核心部位才是真正的芽孢有生命部位，该部位含水量很低，因此赋予了芽孢上述特性。 13.大肠杆菌与酵母菌的主要区别：大肠杆菌不具真正的细胞核，只具有原始状态的核，没有核膜、没有核仁，没有固定形态；酵母菌具有真正的细胞核。大肠杆菌细胞质中不具有细胞器；酵母菌细胞质内具有细胞器，如线粒体、液泡等。大肠杆菌细胞壁的主要成分是肽聚糖和脂类；酵母菌细胞壁 的主要成分葡聚