动物细胞培养总论.pptxVIP

动 物 细 胞 特 点;一、基本概念：;2、组织培养： 将动物的组织取出，在模拟体内生理环境下，在体外的人工条件下生存和生长， 并维持组织的结构和功能不变的技术。 组织培养与细胞培养的关系 在组织培养过程中，由于现有的培养手段还不能长期维持组织的结构和功能不变，动物细胞往往会从组织中迁移生长出来，在组织周围形成一圈单层贴壁生长细胞，这圈细胞又称为生长晕。 组织培养最终变成细胞培养。;3.器官培养： 培养对象是器官的原基、器官的一部分或整个器官， 放在模拟体内的生理环境的体外，使之存活、生长并保持一定功能的技术。 ;抑制细胞从器官培养物中迁移出来。抑制细胞的脱分化，维持器官培养物的结构和功能不变，维持细胞的分化状态。;5、组织工程的意义： 应用生命科学与工程学的原理与技术，在正确认识哺乳动物的正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。;组织工程的基本方法： 是将体外培养的高浓度组织细胞，扩增后吸附于一种生物相容性良好、并可被人体逐步降解吸收的细胞外基质上。该材料可为细胞提供生存的三维空间，有利于细胞获得足够的营养物质，进行气体交换，使细胞按预制形态的三维支架生长。然后将这种细胞生物材料复合体植入机体病损部位，在生物支架降解吸收过程中，种植的细胞继续增生繁殖，形成了新的具有其原来特殊功能和形态的相应组织和器官，达到修复创伤和重建功能的目的。 ;二、动物细胞培养的研究历史;另外，他将7天的鸡胚心肌组织块包埋培养于血浆和鸡胚提取液，观察到心肌细胞搏动达104天， 并采用更新培养基和将原代细胞传代 的培养措施，从而解决了细胞体外长期生存的营养问题。 1951年，Eagle,研发人工合成的培养基。 1975年，Sato 用激素、生长因子代替血清，开发了成分明确的培养基。;三、动物细胞的生长特性;细胞培养方式：;群体培养;;体外细胞生长增殖过程;此期细胞特点： 细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但???旺盛。 初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大，呈二倍体核型。 由于与体内细胞相似性大，可用于检测药物 细胞群是异质的，即各细胞的遗传性状互不相同 细胞相互依存性强，克隆形成率低，即细胞独立生存性差。 克隆形成率（Cloning efficiency）:指细胞群被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞群（克隆）的百分数。;原代培养的方法： 1、组织块培养法：将有机体取出的组织， 切成1mm3大小的组织块，进行培养的 方法。 a）、薄层培养法 b)、反转干涸法 2、酶解培养法：将组织剪成1mm3大小的组织后， 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶溶液进行进行 消化，进行培养的方法。;;鱼类细胞组织块原代培养： ;1）、鱼类消毒处理： 将海水煮沸消毒 加入青霉（1000IU/mL）链霉素（终浓度1000μg/mL） 将鱼放入浸泡24h. 2)、取材： 无菌条件下取鱼的鳃、吻端、鳍、心肝等组织 磷酸缓冲液（PBS）漂洗 剪成1mm3的组织小块。;3）、接种和培养： 用培养液漂洗组织小块数次移入培养瓶， 静置1～2min， 翻转培养瓶，将适量 培养液加在非细胞生长面，静置培养2～4h， 轻轻将培养瓶翻转过来，继续培养 直到长成细胞单层；或加薄层培养液， 24h后补液。;哺乳动物的原代培养： 鼠胚胎制备： （1）孕鼠的准备:交配后雌鼠阴道出现阴道栓计算 胎龄。 （2）杀死孕鼠： （3）取胚胎 ： PBS洗涤浸入含有双抗的 培养液 （4）酶解或是组织块法培养;鸟类胚胎的制备 （1）受精蛋的准备：38℃孵卵箱中静置21d, 每日翻动1～2次 （2）消毒受精蛋 （3）取胚胎：大头朝上，打破大头，小心的撕去气室膜和尿囊绒膜 用镊子夹出胚胎。 （4）浸泡在培养液中备用。;传代培养期： 从一个培养瓶转移到另一个培养瓶去培养的过程。 在全生命期中此期最长。此期细胞增殖旺盛。 呈二倍体核型的细胞系，