红鳍东方鲀精原干细胞鉴定分离及纯化.pdf

第 43 卷 第 4 期 水 生 生 物 学 报 Vol. 43, No. 4 2019 年 7 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA J u l . , 2 0 1 9 doi: 10.7541/2019.094 红鳍东方鲀精原干细胞鉴定、分离及纯化 任玉芹 周 勤 孙朝徽 宋立民 于清海 姜秀凤 王玉芬 王青林 ( 中国水产科学研究院北戴河中心实验站，秦皇岛 066100) 摘要: 为获得高比例精原干细胞, 开展了不同月龄红鳍东方鲀精原干细胞分离纯化研究。采用组合酶消化 法制备不同月龄的精巢单细胞悬液, 通过形态学观察和生殖细胞特异基因vasa免疫荧光鉴别精原干细胞, Percoll不连续梯度(10%、30%和50%)纯化精原干细胞。结果显示: 14月龄雄鱼精巢生殖细胞主要为A型精 原细胞, 精原干细胞占比极显著性地高于22 月龄(P <0.05) 。纯化后精原干细胞主要分布在10%—30% Percoll梯度带中, 14月龄雄鱼生殖细胞主要分布在此层, 且纯化后精原干细胞占比远高于纯化前以及22月 龄纯化前后。结果表明, 14月龄更适用组合酶消化分离, 并通过Percoll梯度离心法获得高比例的红鳍东方 鲀精原干细胞。 关键词: 红鳍东方鲀; 精原干细胞; Percoll; 免疫荧光 中图分类号: Q172 文献标识码: A 文章编号: 1000-3207(2019)04-0797-08 红鳍东方鲀(Takifugu rubripes) 因其味鲜肉嫩, nial, SG)和卵原细胞(Oogonia, OG)[14] 。精原细胞包 营养价值高, 是我国北方海水鱼养殖的主要种类之 括A 型精原细胞、中间型精原细胞和B 型精原细 [1] [15] 一 。相比红鳍东方鲀鱼肉, 俗称“ 白子” 的雄鱼精 胞 , 而进行细胞移植的主要是A型精原干细胞, 即 巢更是被人们视为珍品。由于养殖市场对雄鱼苗 精原干细胞(Spermatogonial Stem Cells, SSCs) 。与 种的需求, 科研工作者开始重视对其性别选择育种 PGCs相比, SSCs不仅同样具有自我更新、多能性 [2— 6] [16] 尤其全雄化技术 。近十年来, 激素诱导性转化 的干细胞特点和分化并发