药材与资源姜黄苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与序列分析.pdfVIP

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 21 期 2014 年 11 月 ·3141 · • 药材与资源 • 姜黄苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与序列分析 1, 2 2 2 2 1* 2 刘建福 ，钟书淳 ，王明元 ，唐源江 ，范燕萍 ，陈 钦 1. 华南农业大学园艺学院，广东 广州 510642 2. 华侨大学 生物工程与技术系，福建 厦门 361021 摘 要：目的 对姜黄 Curcuma longa 苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase ，PAL ）基因（CurPAL）全长进行克隆 并开展生物信息学分析，为姜黄次生代谢产物的生物合成机制研究奠定基础。方法 利用 RT-PCR 和 RACE 相结合的方法， 以姜黄叶片cDNA 为模板，克隆获得 CurPAL 全长，进行生物信息学分析。结果 克隆的 CurPAL （登录号为KJ780359 ）全 长 cDNA 为 1 293 bp，其中包括 5’-UTR 243 bp，3’-UTR 123 bp，含有 1 个 927 bp 的完整开放阅读框（opening reading frame， ORF ），编码 308 个氨基酸；预测蛋白质相对分子质量为 33 000，理论等电点pI 为 5.76；CurPAL 蛋白性质稳定，为可溶性 蛋白；CurPAL 编码的蛋白质序列包含与夹竹桃 PAL 蛋白质相同的脱氨基位点和催化活性位点，氨基酸序列多重比较发现， CurPAL 编码的氨基酸序列与中国李、浙江红山茶、拟南芥、辣椒、小果野蕉 PAL 氨基酸序列的同源性达到 75% 以上；与姜 目类的植物（如小果野蕉）的 PAL 聚为一支，说明两者亲缘关系较近；通过蛋白质二维、三维结构的预测，表明 CurPAL 蛋白为全 α型蛋白，由同源四聚体构成。结论 首次克隆并获得 CurPAL 基因全长 cDNA，为姜黄素生物合成途径的阐明和 改善中药材品质提供科学依据。 关键词：姜黄；CurPAL；苯丙氨酸解氨酶；基因克隆；序列分析；RT-PCR ；RACE 中图分类号：R282.12 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)21 - 3141 - 08 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.21.019 Cloning and sequence analysis of phenylalanine ammonia-lyase gene from Curcuma longa 1, 2 2 2 2 1 2 LIU Jian-fu , ZHONG Shu-chun , WANG Ming-yuan , TANG Yuan-jiang , FAN Yan-ping , CHEN Qin 1. College of Horticulture, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China 2. Department of Biological Engineering and Technology, Huaqiao University, Xiamen 361021, China Abstract: Objective This study aimed at cloning the phenylalanine ammonia-lyase (PAL) gene from Cur