人教版教学山东省沂水一中高二生物12基因工程的基本操作程序选修三.pptxVIP

温故知新：1、基因工程至少需要哪三种工具？2、这三种工具分别起什么作用？1.2 基因工程的基本操作程序问题1 基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一：目的基因的获取？什么是目的基因编码蛋白质的基因 1.目的基因主要是指___________________ 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。2、也可以是具有调控作用的因子已知序列获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库获取目的基因2、利用PCR技术扩增目的基因3、人工合成目的基因未知序列基因组文库部分基因文库(一)从基因文库中获取目的基因1.基因文库概念 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库2.基因文库类型（包含一种生物的所有基因）（包含一种生物的一部分基因）基因组文库与部分基因文库的关系怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢? 根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA、基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。(一)从基因文库中获取目的基因3.基因组文库的构建提取某种生物的全部DNA用适当的 限制酶一定大小的DNA片段将DNA片段 与载体连接导入受体菌中储存基因组文库4.cDNA文库的构建提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。反（逆）转录酶单链DNADNA 聚合酶双链cDNA片段与载体 连接重组载体导入受体菌 中储存cDNA文库cDNA合成过程是：第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA 互补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。第二步，核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链 降解，使之变成单链的DNA。第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用 下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。问题2 为什么用生物发育某个时期的mRNA反转录得的DNA只有这种生物的部分基因？某个时期的发育是基因选择性表达的结果总结两种基因文库的主要区别如下表（课本P10）文库类型cDNA文库基因组文库文库大小小大基因中启动子无有基因中内含子无有基因多少部分基因全部基因物种间的基因交流可以部分基因可以(二)利用PCR技术扩增目的基因多聚酶链式反应1、概念：PCR全称为________________，是一项在生 物____复制_____________的核酸合成技术 体外特定DNA片段2、原理：__________DNA复制模板（目的基因）原料(脱氧核苷酸)3、条件：DNA聚合酶（耐高温）引物（一小段单链DNA）温度控制4、操作前提：一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。5、扩增形式：指数形式（2n）在短时间内大量扩增目的基因6、结果 。7、过程：a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作 用下，_____断裂，形成___________氢键单链DNAb、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与 DNA模板结合，形成局部________。 双链c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物开始进行碱基互补配对，合成与 模板互补的________。 DNA链(二)利用PCR技术扩增目的基因动画演示DNA增殖细胞内复制 .VS. PCR扩增DNA母链1）模板：2）原料：3）酶：DNA母链4种脱氧核苷酸　4种脱氧核苷酸　解旋酶DNA聚合酶引物酶DNA连接酶温度控制Taq DNA聚合酶引物（2个snDNA）(不用DNA连接酶)4）特点:半保留复制半保留复制边解旋边复制全解旋再复制DNA合成仪（三）通过DNA合成仪直接合成目的基因前提：基因比较小、核苷酸序列已知mRNA核苷酸序列基因DNA的核苷酸序列蛋白质的氨基酸顺序目的基因合成推测推测问题4获取目的基因的三种方法应用1、如果知道目的基因两端的核苷酸序列，而且基因比较大，可采用____________ PCR技术扩增2、如果知道目的基因的序列，而且基因比较小，可采用________________化学方法人工合成3、如果不知道目的基因的核苷酸序列，可采用_________________从基因文库获取的方法二：基因表达载体的构建——基因工程的核心1目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。2组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因等启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，RNA聚合酶识别和结合的部位终止