研究生分生实验(全部3次试验)1月10日.pptVIP

四、注意事项 1、转化实验必须在低温中进行，温度波动严重影响转化效率，所用的试剂均应冰浴，细菌保持在4℃以下； 2、转化实验要做好对照，以检测感受态的细胞和重组质粒；以已知质粒转化感受态细胞做阳性对照；以TE缓冲也转化感受态细胞做阴性对照 实验三重组质粒的提取、酶切鉴定 11月14日 重组技术（二） 感受态制备、 转化 培养 11月21日 重组技术（三） 重组质粒提取 酶切鉴定 实验进度安排 实验一外周血单个核细胞总RNA的分离纯化与RT-PCR 一、实验目的 1、掌握外周血单个核细胞的分离 2、掌握单个核细胞中总RNA的提取纯化 3、掌握逆转录的目的和原理 人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）是血液中含未分叶核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。 单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同，红细胞：1.093,白细胞：1.092,淋巴细胞和单核细胞：1.075-1.090,血小板：1.030-1.035,因此利用一种介于1.075-1.090之间的聚蔗糖-泛影葡胺（ ficoll-hypaque ）分离液作密度梯度离心，离心后不同比重的血细胞在分离液中呈梯度分布，从而分离出PBMC。 二、实验原理 聚蔗糖-泛影葡胺（ ficoll-hypaque ） 1.075-1.090 密度 1.030-1.03