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实验四 血凝和血凝抑制试验（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）徐晓娟2011.10.31一、实验目的二、实验原理三、实验材料四、实验步骤五、结果判定一、实验目的了解血凝和血凝抑制试验的原理。了解血凝价和血凝单位的概念。掌握血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判定的方法。 二、实验原理（一）血凝试验（HA）一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做血凝试验。病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作为鉴定病毒的一个指标。HA试验的原理图++++ +++ ++ + -血凝试验结果判定一层RBC均匀铺在孔底者为++++；基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为+++；RBC在孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为++；RBC在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为+;RBC在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为±;红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐者为-。1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210C C 血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。 （二）血凝抑制试验（HI）当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即血凝抑制试验。因此，可以用已知病毒来检测被检血清中的相应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。HA试验的原理图HI试验的原理图三、实验材料鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液制备。鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤3~5次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。0.85%生理盐水。被检血清，采自被检鸡的健康血清。四、实验步骤（一）血凝试验（HA）在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水。在第1孔中加入50μl病毒抗原，反复吸取混匀后吸50μl到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50μl；最后两孔（11、12）为红细胞对照。将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震荡，37℃静置25~30min后观察结果。病毒液的血凝价是1:2？。血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。 （二）血凝抑制试验（HI）在血凝板的1~11孔加入25μl生理盐水，最后一孔（12孔）加50μl。第1孔加待检血清25μl，混匀后吸25μl至第2孔，倍比稀释直至第10孔，混匀后弃25μl。从1~11孔，每空加稀释好的25μl 4个血凝单位的病毒悬液。37 ℃静置25~30min第11、12孔不加第12孔不加如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是1:261:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210C C 血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度。 1个血凝单位：能使50%的红细胞发生凝集的病毒悬液。病毒浓度≥1:24为阳性＜1:22为阴性＝1:23为可疑血凝抑制价将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震荡，在37℃静置25~30min后观察结果。结果判定：以红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点。血凝抑制价是1:2？，被检血清为阴/阳性。 第11孔为病毒对照，应该完全凝集，第12孔为细胞对照，应该完全沉积到孔底。细胞对照HAHI五、结果判定血凝价是1：？；血凝抑制价是1：？；被检血清为阴性还是阳性?