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核酸内切限制酶EcoRI及修饰的甲基化酶MEcoRI的限制与修饰作用
;核酸内切限制酶HindIII对双链DNA分子的切割作用
;具有粘性末端的DNA片段结合方式
;;
（2）DNA连接酶（Ligase）
1）粘性末端DNA片段的连接
2）平末端DNA片段的连接
a.同聚物加尾法（homopolymertail-joining）
b.衔接物连接法（linker）
c.DNA接头连接法（adapter）
3）热稳定的DNA连接酶（thermostable DNA ligase）
a.寡核苷酸连接测定法（oligonucleotide ligation assay）
b.连接酶链式反应（ligase chain reaction，LCR）或
连接扩增反应（ligation amplification reaction）
a）裂口连接酶链式反应
LCR探针（LCR probe）
b）不对称裂口连接酶链式反应（AG—LCR） ;应用互补的同聚物加尾法连接DNA片段
;用衔接物分子连接平末端的DNA片段
;双衔接物连接法的基本程序
; 具异常的5’-OH粘性末端结构的BamHI接头的连接机理
;寡核苷酸连接测定原理
;DNA连接酶链式反应（LCR）原理
;不对称裂口DNA连接酶链式反应（AG-LCR）的分子机里;
（3）DNA聚合酶（DNA polymerase）
1）DNA聚合酶I
a. DNA缺口转移（nick translation）
b. DNA杂交探针的制备
2）大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段与DNA末端标记
3）T4DNA聚合酶取代合成法标记DNA片段
4）依赖RNA的DNA聚合酶与互补DNA的合成
5）T7 DNA聚合酶
6）修饰的T7 DNA聚合酶;DNA聚合酶I催化合成DNA合成链按5’—3’方向延长; 线性和环形DNA分子的取代缺口转移;用T4DNA聚合酶的取代合成法标记DNA片段末端制备探针;（4）DNA和RNA的修饰酶
1）末端脱氧核苷酸转移酶与同聚物加尾
（terminal deoxynucleotidyl transferase）
2）T4多核苷酸激酶（polynucleotide kinase）与DNA分子
5’末端 的标记
3）碱性磷酸酶与DNA脱磷酸作用
细菌碱性磷酸酶（bacterial alkaline phosphatase）
小牛肠碱性磷酸酶（calf intestinal alkaline phosphatase）
（5）核酸外切酶（exonucleases）
1）核酸外切酶VII（exoVII）
2）核酸外切酶III（exoIII）
3）入核酸外切酶（入exo）和T7基因6核酸外切酶 ; 碱性磷酸酶的活性;（6）单链核酸内切酶（single endonucleases）
1）SI核酸酶与RNA分子定位
2）Bal31核酸酶与限制位点的确定
SI核酸酶的活性
; 同摸板DNA有共同线性关系的RNA分子的定位; 应用Bal31核酸酶诱发DNA分子发生缺失突变;6. 基因克隆的质粒载体
（1） 质粒的生物学特性
1）质粒DNA
; 2）质粒DNA编码的表型
质粒DNA的分子构型
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