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专题五 DNA和蛋白质技术
课题1 DNA的粗提取
课标要求
(一)、能力要求
1. 掌握DNA粗提取与鉴定的原理
2. 能够掌握提取DNA的实验操作中的主要步骤
3. 熟练进行实验操作,掌握实验方法
4. 根据实验目的和要求进行实验设计
(二)、内容要求
1. 了解DNA的物理化学性质,DNA的溶解性
2. 二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。
重难热点归纳
课题重点:DNA的粗提取和鉴定方法。
课题难点:DNA的粗提取和鉴定方法。
复习策略
了解DNA的物理化学性质,DNA的溶解性
二苯胺法鉴定DNA的方法和原理
说明实验原理;明确每一步操作的道理;能够设计实验装置;学会控制实验条件;分析和评价实验方案、实验装置、实验成败的原因
经典例题剖析
例1 在DNA分子的粗提取实验中,两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )
稀释血液、冲洗样品
使血细胞破裂,降低NaCl浓度使DNA析出
使血细胞破裂,增大DNA溶解度
使血细胞破裂,提取含杂质较少的DNA
解析:在该实验过程中,第一次加入蒸馏水的目的是使血细胞过度吸水而破裂,以便核物质溶解。第二次加入蒸馏水是为了降低NaCl浓度至0.14mol/l,因为此时的DNA溶解度最小,可使DNA析出。
例2 在制备鸡血细胞液的过程中,加入柠檬酸钠的目的是( )
防止凝血 B. 加快DNA析出 C. 加快DNA溶解 D. 加速凝血
解析:柠檬酸钠的作用是利用柠檬酸根离子与血浆中Ca2+离子结合成柠檬酸钠,降低Ca2+离子浓度,使有关凝血酶活性降低。因此柠檬酸钠是抗凝血物质,防止凝血,有利于鸡血细胞液的制备。
答案:A
去除DNA杂质时,可直接在滤液中加入( ),反应10-15min
A. 嫩肉粉 B. 蒸馏水 C. 2mol/lNaCl D. 酒精
解析:嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质
答案: A
DNA在NaCl溶液中溶解度有二重性,随着NaCl溶液的变化而变化。
(1)请在下列NaCl溶液中选出溶解度能使DNA析出最彻底的一种( )和溶解度最高的一种( )
A. 0.14mol/l B. 2mol/l C. 0.15mol/l D. 0.3mol/l
(2)DNA不溶于酒精溶液,但细胞中的某些物质却可以溶于酒精溶液,利用这一原理可以____________,可以推测溶于酒精中的物质可能有____________。
(3)利用DNA与_____变蓝色的特性,将该物质作为鉴定______的试剂。其实验过程要点是向放有_____的试管中加热4ml的____。混合均匀后,将试管置于___5min,待试管______,观察试管中溶液颜色的变化,这个实验也说明DNA耐___温。
解析:根据实验原理可知DNA在0.14mol/l的NaCl溶液中溶解度最低,在高浓度2mol/l中,溶解度最高。DNA存在于染色体上,为了把DNA和其他物质分开,采取DNA不溶于酒精的方法,目的是除去杂质;利用DNA与二苯胺(沸水浴)成蓝色的特性,可以鉴定提取的DNA。
答案:(1)A;B
(2)除去杂质;某些脂类、蛋白质、糖类或其他大分子物质
(3)二苯胺;DNA;DNA;二苯胺试剂;沸水中水浴加热;冷却后;高
关于DNA在NaCl溶液中的溶解度,下面叙述中正确的时( )
随着NaCl溶液浓度的增大,DNA在NaCl溶液中的溶解度也增大
随着NaCl溶液浓度的减少,DNA在NaCl溶液中的溶解度也减少
DNA在NaCl溶液中的溶解度与NaCl溶液的浓度无关
当NaCl溶液的浓度为0.14mol/l时,DNA的溶解度最低
答案:D
在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中,将提取获得的含有DNA的粘稠物(还含有较多杂质)分别处理如下:
放入0.14mol/l的NaCl溶液,搅拌后过滤,得滤液A和粘稠物a
放入2mol/l的NaCl溶液,搅拌后过滤,得滤液B和粘稠物b
放入冷却的95%的酒精溶液中,搅拌后过滤,得滤液C和粘稠物c
以上过程获得的滤液和粘稠物中因含DNA少而可以放弃的是_____。
解析:在不同浓度的NaCl溶液中DNA的溶解度是不同的。在0.14mol/l的NaCl溶液中DNA的溶解度最小,呈丝状物析出。在2mol/l的NaCl溶液中DNA的溶解度最大,所以DNA呈溶解状态,过滤后存在于滤液中。酒精溶液可使DNA分子凝集,呈丝状物,过滤后存在于粘稠物中。
答案:A、b、C
基础试题训练
1. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是( )
A、氯化钠的浓度越低,对DNA的溶解度越大
B、人血也可代替鸡血进行实验
C、柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂
D、DNA不能溶于酒精
2. 在破碎鸡血细胞时,要先
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