上海等级考基因工程限制酶的选择与使用专题训练.docVIP

基因工程三大工具 1、限制性核酸内切酶——剪刀 ①定义：可以识别特定的核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶 ②来源：主要从原核细胞中分离 ③作用结果：产生黏性末端或平末端 黏性末端 平末端 思考1： ①若想获得一个特定性状的基因，必需要用限制酶切几个切口？产生几个黏性末端 ②把两种来源不同的DNA用一种限制酶切割，产生的黏性末端会怎样呢？ 2、DNA连接酶——针线 ①定义：能将限制酶切割产生的黏性末端之间的缝隙“缝合”起来 ②特点：无特异性 3、运载体 ①种类：原核生物的质粒，噬菌体，动植物病毒 ②运载体必须具备以下条件：DNA分子 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 具有多个限制酶切位点，以便与外源基因连接 具有某些标记基因，便于进行筛选，如抗性基因等 具有复制起点和启动子 ③常用的运载体——质粒：小型双链环状DNA分子 基因工程流程 获取目的基因 通常有以下几种方法获取目的基因： ①从细胞中直接分离 ②人工合成：反（逆）转录法；根据已知氨基酸序列合成相应DNA 目的基因与运载体重组 ①用相应的限制酶切割目的基因及载体， ②将具有相同末端的目的基因和载体用DNA连接酶连在一起，形成重组DNA分子 思考2：向用同一种限制酶处理后的目的基因和质粒混合物中加入DNA连接酶，最终得到的重组DNA分子有几种？请用图示表示 导入受体细胞 ①将重组子导入受体细胞 ②常用的受体细胞有：大肠杆菌，枯草杆菌，土壤农杆菌，酵母菌等 ③方法： 导入 植物细胞：农杆菌转化法（ 转基因抗虫棉用的是花粉管通道法）； 导入 动物细胞：显微注射技术（注射入受精卵中）； 导入 原核生物：一般是将细菌用氯化钙处理，以增大 细菌细胞壁的通透性，使含有 目的基因的 重组质粒进入 受体细胞。 筛选含目的基因的受体细胞 限制酶的选择 首先所选用的酶在目的基因和质粒上都有酶切位点， 一看目的基因：目的基因要切完整 二看质粒：①要保留至少一个标记基因 ②复制起点和启动子（如果图上有）不能切 ③所切位置必需在复制起点与终点或者启动子与终止子之间 三看重组子：有些题目要求目的基因要与质粒高效连接 例1、（2019年松江一模）生物技术及生命科学的应用。（13 分） 下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图 1、图 2 中标注了相关限制酶的酶切位点。 转基因技术中通常用图 1 中质粒作为载体，质粒的本质是 。 用图 1 中质粒和图 2 目的基因构建重组质粒，应选用 两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过 酶作用后获得重组质粒。 若 BamH I 酶切的 DNA 末端与 Bcl I 酶切的 DNA 末端连接，连接部位的 6 个碱基对序列为 例2、（2019年静安一模）生物工程（12 分） 研究发现，利用抗体抑制肿瘤细胞表面的 CD47 蛋白的活性，可促进巨噬细胞吞噬肿瘤细胞。为制备抗 CD47 抗体，研究人员先利用基因工程方式制备 CD47 蛋白，图 5 为含 CD47基因的外源 DNA、质粒 DNA 的有关信息，EcoR I、BamH I、Sal I、Xho I 均为限制酶，Kanr、Tcr 分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。 1.（2分）为了形成合适的重组质粒，应该选用限制酶________切割外源DNA和质粒DNA。 A．EcoR I 和 Xho I B．BamH I 和 Xho I C．EcoR I 和 Sal I D．BamH I 和 Sal I 例3、（2019青浦一模）回答有关基因工程与微生物的问题。（12 分） 利用微生物分解废纸是一种环保的方式，但废纸中的纤维素分子量大不能直接进入酵母菌，且酵母菌无法分解利用环境中的纤维素。为解决这一难题，科学家将纤维素酶基因通过重组质粒导入酵母菌。其所用质粒及其酶切位点如图 16，外源 DNA 上的纤维素酶基因及其酶切位点如图17。 1.（2 分）图 17 中的纤维素酶基因作为________________，质粒作为________________。 2.（2 分）为使纤维素酶基因能够与质粒有效组合，应选用最合适的限制酶是___