骨髓细胞化学染色PPT课件.ppt

1.细胞内铁：计算100个中幼红细胞、晚幼红细胞，计数阳性率，正常值20-45%；铁颗粒1-5粒，一般不超过10粒。2.细胞外铁：观察骨髓小粒中巨噬细胞胞浆内蓝色颗粒。正常为（+）或（++）。 [参考值] * .  [临床意义]??? 铁染色主要用于缺铁性贫血与铁粒幼细胞性贫血的诊断，也是指导铁剂治疗的一个灵敏而可靠的指标。特别是铁粒幼细胞贫血形成特有的环形铁粒幼细胞，也易与其他类型贫血区别。 * . 中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色(钙-钴法） ? [原理]?? 当细胞内的NAP活性存在时，在pH为9.2～9.5的碱性条件下，它可将作用液中的基质β-甘油磷酸钠水解，释出磷酸，进而与作用液中的钙离子结合，成为磷酸钙沉淀，再经过硝酸钴和硫化胺的作用，生成不溶性硫化钴，呈黑色沉淀定位于胞浆。 * . NAP染色测定(偶氮偶联法） [检测原理] 血细胞内的碱性磷酸酶（NAP）在碱性环境下，水解α-磷酸萘酚钠，产生α -萘酚。后者与重氮试剂偶联形成有色沉淀物，沉淀物的显色深浅 与NAP活性成正比。 [试剂盒组成] 1. NAP固定液：1瓶×5 2. NAPI液(α-磷酸萘酚钠)：1瓶× 5 3. NAPII(坚牢蓝B+tris-HCl)液:1瓶× 5 4.苏木素复染液:1瓶× 5 * . [方法] 1.新鲜涂片滴加固定液(4 °C)30秒,水洗待干。 2.将I液置入II液混合成为基质液。将涂片置入后，37°C放置30分钟，流水冲洗数分钟，取出待干。 3.苏木素复染1-2分钟，水洗，待干，镜检。 4.结果显示： 阳性——细胞内出现暗红色沉淀物，定位于胞质。 阴性——细胞内无红色沉淀物。 * . (-) * . (+) * . (++) * . (+++) * . (++++) * . (+++)、（+）、（++++） * . [积分计算] 在油镜下计数100个成熟中性粒细胞，包括杆状核和分叶核粒细胞，结果分级为（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++），分别为0-4分，所有细胞分值之和即为积分值，阳性细胞之和为阳性率。正常范围：10-100分，阳性率10-50% * . [注意事项] 1.标本宜新鲜，若不能及时测定可先用固定液处理后，可保存数天。 2.基质液配制后要及时应用，以免失效或降低阳性强度。 3.基质液为一次性使用，配制后不能反复应用。 * . [临床意义] 1.各种急、慢性粒细胞性白血病，其NAP积分可降低甚至为零。 2.各种炎症（细菌性），手术后，灼伤等NAP积分均可升高。 3. NAP活性对下列疾病有鉴别诊断价值： 1）.慢性粒细胞白血病与类白血病反应的鉴别2 ）.慢性粒细胞白血病与其他骨髓增生性疾病 的鉴别 * . 3） PNH与再生障碍性贫血的鉴别 4） 恶性组织细胞病与反应性组织细胞增生症的鉴别 5） 真性红细胞增多症与继发性红细胞增多症的鉴别 6） 区别细菌性感染和病毒性感染 * . ?粒细胞和部分单核细胞胞浆中存在过氧化酶，它可将底物(H2O2)分解产生出新生态氧，进而使无色的联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，形成稳定的蓝色物质。 过氧化物酶(POX)染色[原理] * . 阳性的中性粒细胞 * . 阳性的原始粒细胞和阴性的淋巴细胞 * . 阳性的粒细胞和阴性的巨核细胞 * . [临床意义] 用于鉴别急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病。POX主要存在于粒系细胞中，细胞越成熟，其反应越强。原始单核细胞呈阴性，幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性反应。淋巴系、巨核系、红细胞系各阶段细胞均呈阴性反应。 * . 酸性磷酸酶(ACP)染色 ? [原理]??? 在酸性条件下(pH值4.9)，磷酸酶将作用液中的基质(甘油磷酸钠)水解，产生磷酸，进而与铅作用生成磷酸铅沉淀于细胞酶活性存在处，然后与硫化铵作用，生成黑色硫化铅沉淀。 * . [临床意义] 1.网状细胞、吞噬细胞、组织细胞、粒细胞和单核细胞此酶呈阳性反应。 2.毛细胞白血病时，毛细胞呈阳性反应，且不为L-酒石酸所抑制。 3.戈谢细胞ACP染色阳性，而尼曼-匹克细胞呈阴性。 * . 特异性酯酶(SE)染色??? [原理]??? 氯醋酸AS-D萘酚酯酶为粒细胞所特有，故称特异性酯酶，可将基质中的氯醋酸AS-D萘酚水解而产生萘酚AS-D，后者与重氮盐偶联生成不溶性有色沉淀定位于胞浆中。 * . [临床意义]??? 1.正常血细胞反应：SE在分化好的原始粒细胞可呈弱阳性反应，早幼粒细胞呈强阳性反应，SE活性不随粒细胞的成熟而增强。单核细胞呈阴性或弱阳性反应，其他细胞均呈阴性反应。 * . 2.急性白血病类型的鉴别：急性粒细胞白血病时，原始粒细胞和早幼粒细