变性蛋白的复性和基因工程药物的质量控制.pptVIP

变性蛋白的复性 一、蛋白质变性 由于外界因素的作用，使天然蛋白质分子的构象发生了异常变化，从而导致生物活性的丧失以及物理、化学性质的异常变化 ，这种现象称为蛋白质的变性()。 变性可以涉及次级键、二硫键的断裂 但不涉及一级结构上肽键的断裂 二、蛋白质复性的意义 →目标蛋白质没有生物活性(包涵体) →分离回收包涵体， →溶解包涵体(目标蛋白质恢复应有的天然构象和活性) 三、变性蛋白质的复性 就是脱除变性剂使溶解的包涵体蛋白质的伸展肽链折叠成正确的空间结构。 包涵体形成的原因——主要是高水平表达的结果。 在高水平表达时，新生肽链的聚集速率超过蛋白的正确折叠的速率就会导致包涵体的形成。 重组蛋白在大肠杆菌中表达时，缺乏一些蛋白折叠过程中需要的酶和辅助因子，如折叠酶和分子伴侣等。 包涵体的分离和溶解  1、包涵体的分离 收集重组菌，破碎细胞；离心除上清；使用低浓度的变性剂洗涤沉淀。 2、包涵体的溶解 打断包涵体蛋白分子内和分子间的各种化学键，使多肽链伸展。 一般用强的变性剂，如脲、盐酸胍或硫氰酸盐，，各种溶解方法都各有利弊。 蛋白复性方法 1、稀释、透析复性法 蛋白质复性的最大问题，是在复性过程中形成中间体和多聚体，中间体阻碍作用大的使蛋白质正确折叠困难，复性就困难；阻碍小或无阻碍的容易复性。降低蛋白浓度可以减少中间体形成