生物化学-第6章 核酸-cpl (2).ppt

 噬菌体 2006-8-19 35S标记蛋白质外壳的噬菌体?感染?细菌?细菌无放射性。 32P标记DNA内芯的噬菌体?感染?细菌?细菌有放射性。 这一结果确凿无疑地证明，进入寄主细胞内的是噬菌体DNA，而不是蛋白质外壳。 2006-8-19 噬菌体的标记实验 2006-8-19 原核生物与真核生物DNA DNA分子中不同排列顺序的DNA区段构成特定的功能单位，即基因 (gene)。 细胞内染色体所包含的DNA总体称为基因组(genome)。 原核生物基因组结构特点 基因组较小，形式多样，可能是DNA，也可能是RNA，可能是单链,双链的，闭环分子，线性分子；细菌染色体为环状双链DNA分子。 功能相关的结构基因常常串连在一起，并转录在同一个mRNA分子中，称为多顺反子(polycistron)。 DNA分子绝大部分用于编码蛋白质，非编码区通常包含控制基因表达的序列。 基因重叠是病毒基因组的结构特点。  基因重叠 例如ΦX174的E基因全部包括在D基因内，B基因则全部包括在A基因内。 这种现象主要存在于病毒DNA分子中，可能是由于DNA分子太小，又要装入相当数量基因的缘故。 2006-8-19 采莲人在绿杨津，在绿杨津一阕新； 一阕新歌声漱玉，歌声漱玉采莲人。 采 莲 人 在 绿 杨 一 津 玉 新 漱 歌 厥 声 真核生物基因组结构特点 单顺反子(monocistron)，即一个结构基因转录、翻译成一个mRNA分子，一条多肽链; 存在大量重复序列，包括卫星DNA、反向重复序列和较复杂的重复单位组成的重复序列; 基因组中不编码的区域多于编码区域 基因是不连续的，在真核生物结构基因的内部存在许多不编码蛋白质的间隔序列(intervening sequences)，称为内含子(intron)，编码区则称为外显子(exon)。 基因组远大于原核生物的基因组，具有许多复制起点，而每个复制子的长度较小。 核酸的降解指通过核酸酶或物理、化学的方法使核酸的3′, 5′磷酸二酯键断裂，多聚核甘酸链变成小段寡聚核甘酸链。 第5节 DNA的性质 1. 降解与变性 振荡、搅拌、反复冻融等易导致DNA的降解 指DNA分子由稳定的双螺旋结构，松解为单链无规则线性结构的现象。 DNA的变性只涉及维持双螺旋稳定性的次级键的断裂，一级结构并不改变。 凡能破坏双螺旋稳定性的因素都可以成为变性的条件，如过量酸，碱，加热，变性试剂（尿素、酰胺）以及某些有机溶剂（乙醇、丙酮、尿素等） DNA的变性 变性后的 DNA生物活性丧失，同时发生一系列理化性质的改变，包括： 黏度下降； 沉降系数增加； 比旋光度下降； 紫外光吸收值升高等。 DNA的变性 酸碱变性 低或高的pH值条件趋向影响DNA双螺旋中氢键的形成，导致DNA的变性。 低离子浓度 双链DNA浓度过低，带正电荷的物质减少导致DNA 上带负电荷的磷酸基团部分脱防护，使相连的磷酸基团相互斥力增加，使DNA双链分离。 Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，50%的DNA分子发生变性时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。 一般DNA的Tm值在82-95?C之间 热变性 G和C的含量高，Tm值高：因而测定Tm值，可反映DNA分子中G、C含量，可通过经验公式计算： 　　（G+C)%=(Tm-69.3) ×2.44 Tm大小可反映出DNA的均一性：均质DNA的熔解过程发生在一个较小的温度范围内；异质DNA的熔解过程发生在一个较宽的温度范围内。 介质中的离子强度：低浓度介质中，Tm值低，范围宽。 影响Tm值的因素 增色效应（hyperchromic effect）： 变性后DNA对260nm紫外光的吸收率比变性前明显增加，这种现象称为增色效应。 减色效应（hypochromic effect）： 当温度缓慢降低时，吸光率下降，DNA由无规则单链再转变成双链，此时紫外吸收值降低，这种现象称之为减色效应。 增色效应 DNA的紫外吸收光谱 定义：变性DNA在适当的条件下又可使两条彼此分开的链重新缔合成双螺旋，这个过程叫~。 DNA复性的影响因素： 　①温度和时间 　②DNA浓度 　③ DNA序列的复杂性 2. 复性与杂交 DNA复性 退火 淬火 杂 交 定义：在DNA变性后的复性过程中，如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件（温