2检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质.docxVIP

2+2+ 2+ 2+ 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 一．实验目的： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，阐明实验原理—颜 色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特 定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握 NaOH 溶液和 CuSO4 溶液的使用方法。 二．实验原理： 某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。 1．生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。 前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖； 蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织 中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。 可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生 成砖红色的 Cu  2 O 沉淀。如： 葡萄糖 + 2Cu + 4OH  —  加热  葡萄糖酸 + Cu  2  O↓（砖红色）+ H  2  O 即 Cu 被还原成 Cu  2  O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色沉淀 淀粉遇碘变蓝色（直链）或紫（红）色（支链）。 2．脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正 常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上， 脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。 在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤 的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹 Ⅳ，苏丹黑及油红 O 等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附 而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料 2+ 2+ 着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染 色效果是有好处的。 脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油、明胶和 阿拉伯糖胶等。 脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或橙红色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色） ，胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。 苏丹Ⅲ染色液染色：脂肪呈橙红，胞核呈兰色 3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽 键，在碱性 NaOH 溶液中能与双缩脲试剂中的 Cu 作用，产生紫色反应。 ） 三．实验材料 ．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、 梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）经试验比较，颜色反应的明显程 度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 ．做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般 要浸泡 3~4 小时（也可用蓖麻种子）。 ．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。 ．淀粉的鉴定：马铃薯匀浆。 00 0 0 四、实验试剂 1．斐林试剂（包括甲液：质量浓度为 0.1g/ mL NaOH 溶液和乙液：质量浓度为 0.05g/ mL CuSO  4 溶液） ．苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液 ．双缩脲试剂（包括 A 液：质量浓度为 0.1g/ mL NaOH 溶液和 B 液：质量浓 度为 0.01g/ mL CuSO4 溶液） 馏水。 五、方法步骤： （一）可溶性糖的鉴定 4．体积分数为 50%的酒精溶 5．碘液 6．蒸 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1. 制备组织样液。 （去皮、切块、研磨、 过滤） 苹果或梨组织液必须临时 制备。 因苹果多酚氧化酶含量 高，组织液很易被氧化 成褐色，将产生的颜色 掩盖。 2. 取 1 支试管，向试管 内注入 2mL 组织样液。 3. 向试管内注入 1mL 新 制的斐林试剂，振荡。 应将组成斐林试剂的甲液、 乙液分别配制、储存，使 用前才将甲、乙液等量混 匀成斐林试剂； 切勿将甲液、乙液分别加 入苹果组织样液中进行检 测。 斐林试剂很不稳定，甲、 乙液混合保存时，生成 的 Cu ( OH ) 2 在 70~ 90 C 下分解成黑色 CuO 和水； 甲、乙液分别加入时可 能会与组织样液发生反 应，无 Cu OH 生成。 4. 试管放在盛有 50- 65 C 温水的大烧杯中， 加热约 2 分钟，观察到 溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色（沉淀） 最好用试管夹夹住试管上 部，使试管底部不触及烧 杯底部，试管口不朝向实 验者。 也可用酒精灯对试管直接 防止试管内的溶液冲出 试管，造成烫伤； 缩短实验时间。 。 。 加热。 （二）脂肪的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 花生种子浸泡、去皮、切下一 些子叶薄片，将薄片放在载玻 片的水滴中，