32细菌的荚膜染色实验详解.pptxVIP

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细菌的荚膜染色;实验目的与要求;某些细菌生长到一定阶段,在一定营养条件下可向细胞壁表面分泌一层松散透明、疏松、柔软、粘液状或胶质状的物质,即为荚膜(Capsule)。 荚膜的化学成分:主要是多糖、多肽、蛋白质、脂以及由它们组成的复合物—脂多糖、脂蛋白等。 荚膜的功能:是细胞外碳源和能源性贮藏物质,能保护细胞免受干燥的影响,同时能增加某些病原菌的致病能力,抵御宿主吞噬细胞的吞噬。 细菌荚膜与生产生活:葡聚糖、黄原胶的提取,龋齿、面包发粘,等。;染色原理与说明;材 料;方 法;负染色法;制菌液:加1滴墨水于洁净的载玻片上,挑少量菌体与其充分混合均匀。? 加盖玻片:放一清洁盖玻片于混合液上,然后在盖玻片上放一张滤纸,向下轻压,吸去多余的菌液。? 镜检:先用低倍镜、再用高倍镜观察。? 结果:背景灰色,菌体较暗,在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。?;制菌液:加1滴6%葡萄糖液于洁净载玻片一端,挑少量菌与其充分混合,再加1环墨水,充分混匀。? 制片:左手执载玻片,右手拿一边缘光滑的盖玻片,使其一边与菌液接触、菌液沿玻片接触处散开,然后以30度角,迅速而均匀地将菌液拉向玻片的一端,使菌液铺成一薄膜。? 干燥:空气中自然干燥。? 固定:用甲醇浸没涂片,固定1?min,立即倾去甲醇。? 干燥:在酒精灯上方,用文火干燥。? 染色:用甲基紫染1—2min。? 水洗:用蒸馏水轻洗,自然干燥。? 镜检:先用低倍镜再高倍镜观察。? 结果:背景灰色,菌体紫色,荚膜呈一清晰透明圈。?;涂片:按常规法涂片,可多挑些菌体与水充分混合,并将粘稠的菌液尽量涂开,但涂布的面积不宜过大。? 干燥:在空气中自然干燥。? 染色:用Tyler染色液染5~7min。? 脱色:用20%CuSO4水溶液洗去结晶紫,脱色要适度(冲洗2遍)→用吸水纸吸干→立即加1~2滴香柏油于涂片处,以防止CuSO4结晶的形成。? 镜检:先用低倍镜再用高倍镜观察。? 结果:背景蓝紫色,菌体紫色,荚膜无色或浅紫色。?; 涂片方法;加盖玻片时不可有气泡,否则会影响观察。? 应用干墨水法时,涂片要放在火焰较高处并用文火干燥,不可使玻片发热。? 在采用Tyler法染色时,标本经染色后不可用水洗,必须用20%CuSO4冲洗。;作业思考题?

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