植物病毒病诊断与鉴定.pptVIP

植物病毒病的诊断与鉴定;植物病毒病的诊断与鉴定;1.植物病毒病的概况;1.植物病毒病的概述;1.植物病毒病的概述;1.植物病毒病的概述;1.植物病毒病的概述植物病毒学研究历史：;1.植物病毒的概述植物病毒的命名;2.植物病毒的形态、结构与组成2.1植物病毒的形态;2.2植物病毒的结构;2.3植物病毒的组成;;3.植物病毒病的症状特征;2020/3/10;花叶（变色界限明显）;叶片卷曲;3.植物病毒病的症状特征;2020/3/10;3.植物病毒病的症状特征;2020/3/10;3.植物病毒病的症状特征;3.植物病毒病的症状特征;3.植物病毒病的症状特征;3.植物病毒病的症状特征;3.植物病毒病的症状特征;植物病毒的分类是将已知病毒按一定标准、相似程度或相关性的顺序排列，拼成一个系统，即分类系统。 植物病毒鉴定的主要目的是确定一种病毒在分类系统中的地位，由于植物病毒个体微小，结构简单，对寄主的依赖性强，鉴定工作难度大，技术性强，对工作条件的要求高。 鉴定植物病毒过去大多采用病毒间生物学特性的差异，如所致症状类型、传播方式、寄主范围等；现在则增加了病毒核酸、蛋白分子生物学、生物化学等方面的方法。 常用的方法有生物学实验、血清学检测和电子显微镜观察等。 ;一、生物学实验;表4-1 黄瓜花叶病毒属三种病毒在鉴别寄主植物上的症状反应 ;二、电子显微镜技术;三、血清学技术;琼脂双扩散法：在一定浓度的琼脂凝胶中，抗体和抗原互相扩散，在适当的位置形成沉淀；沉淀线的形状说明抗原和抗体的相互关系。 酶联免疫吸附(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA)法：该方法利用了酶的放大作用，使免疫检测的灵敏度大大提高。与其它检测方法相比较，ELISA有突出的优点：一是灵敏度高，检测浓度可达1-10ng／m1;二是快速，结果可在几个小时内得到；三专化性强，重复性好；四是检测对象广，可用于粗汁液或提纯液，对完整的和降解的病毒粒体都可检测，一般不受抗原形态的影响；五是适用于处理大批样品，所用基本仪器简单，试剂价格较低,且可较长期保存。具有自动化及试剂盒的发展潜力。ELISA是实现“快速、准确、经济”检测的最好手段之一 ;四、核酸杂交及PCR技术;聚合酶链式反应(PCR)是在短时间内大量扩增核酸的有效方法，用于扩增位于两段已知序列之间的DNA 区段。从已知序列合成两段寡聚核苷酸作为反应的引物，它们分别与模板DNA两条链上的各一段序列互补且位于待扩增DNA区段的两侧。反应时，首先在过量的两种引物及4种dNTP参与下对模板DNA进行加热变性。随之将反应混合液冷却至某一温度使引物与其靶序列发生退火。此后退火引物在耐热的洲A聚合酶作用下得以延伸。如此反复进行变性、退火和DNA合成这一循环。每完成一个循环，理论上就使目的DNA产物增加1倍，在正常反应条件下，经25—30个循环扩增倍数可达百万。 PCR扩增在检测标本中病原的核酸序列、由少量RNA生成cDNA文库、生成大量DNA以进行序列测定、突变的分析等方向已经得到广泛的应用。 ;五、物理化学等特征;4 ．沉降系数及分子量 沉降系数S是指一种物质在20℃水中在1达因(1／981g)的引力场中沉降的速度，单位是每秒若干厘米，因这一单位太大，多采用其千分之一，即Svedberg单位。植物病毒的S20ω常在50S到数千S之间。沉降系数的测定要用超速分析离心机，根据该病毒在一定离心力下沉降的速度来计算。有了沉降系数还可以来计算分子量。 5．光谱吸收特性 由于蛋白质和核酸都能吸收紫外线，蛋白质的吸收高峰在280nm左右，核酸在260nm左右。因此260／280的比值可以表示病毒核酸含量的多少，用于区分不同的病毒，比值小的多是线条病毒，比值高可能是球状病毒；对同一种纯化的病毒，紫外吸收值可以表示病毒的浓度，对未纯化的病毒其260／280比值偏离标准值的情况，说明病毒的纯度.文献中常有E0.1%1cm260nm值,表示该病毒在0．1％浓度，光径为1cm比色杯中在260nm处的吸收值。 6．植物病毒的化学特性 主要是指核酸的类型、核酸的链数以及核酸的分子量、核酸在病毒粒体中的百分含量等。病毒核酸的这些特性用在病毒的分科、分属之中。 ;选用无毒材料;组脱毒育苗;2020/3/10;2020/3/10;2020/3/10;docin/sanshengshiyuan doc88/sanshenglu