植物组织培养第十一章植物种质资源保存.pptVIP

第十一章 植物种质资源的保存;本章内容提要： 一、概念及保存类型 二、种质资源离体保存 （一）、低温保存 （二）、超低温保存 （三）、生长抑制剂保存;一、概念及保存类型;1、原生境保存 将植物的遗传材料保存在它们的自然环境中。 原生境保存的地方大多是植物保区； 另一种方法为农田种植保存。 ;珍宝岛国家级自然保护区;美国、马里兰、农田 ;2、非原生境保存 将植物的遗传材料保存在不是它们的自然生境的地方。 非原生境保存方式有：植物园、种子库、种质圃??试管苗库、超低温库等。 保存方法有：种植保存、贮藏保存、离体保存和基因文库保存。;华南植物园 ;昆明野生生物种子库 ;超低温库;二、种质资源离体保存;（一）低温保存 一种缓慢生长保存方法，是通过控制培养温度来限制培养物各种生长因子的作用，使培养物生长减少到最低限度。 ;低温保存冰箱;低温保存的基本特征：保存材料的定期继代培养，不断繁殖更新； 基本措施是：控制保存材料所处的温度和光照。 延缓保存材料生长速度的另一项措施是：改变培养基的成分。;（二）超低温保存 又称冷冻保存，一般以液N2为冷源，使保存温度维持在-196℃。;1、保存原理 低温冰冻过程中，如果生物细胞内水分结冰，细胞结构就遭到不可逆的破坏，导致细胞和组织死亡。 植物材料在超低温条件下，冰冻过程中避免了细胞内水分结冰，并且在解冻过程中防止细胞内水分次生结冰而达到植物材料保存目的。 植物细胞含水量大，冰冻保存难度大，投放液N2中易引起组织和细胞死亡，故须借助于冷冻防护剂，防止细胞冰冻或解冻时引起过度脱水而遭到破坏，保护细胞。 ;超低温冰箱;2、基本程序 基本程序包括： 预处理、冷冻处理、冷冻贮存、解冻 和 再培养。;陈传红 制作;（2）冷冻处理 冷冻处理的方法有： 快速冷冻法； 慢速冷冻法； 预冷冻法； 干燥冷冻法。 ;a、快速冷冻法 指将植物材料从0℃或者其他预处理温度直接投入液氮中保存的方法，降温速度为1000℃/min。 采用该法要求细胞体积小、细胞质浓厚、含水量低、液泡化程度低的材料。;b、慢速冷冻法 将处于0℃或其他预处理温度的材料以 1～2℃/min的降温速度从起始温度降到 -100℃，稳定1h后，投入到液氮保存或以此降温速度连续降温至 -196℃ 的方法。 适宜保存的材料有：成熟的、含有大液泡和含水量高的细胞，对于保存在悬浮培养中的细胞特别有效。;c、预冷冻法 指将植物保存材料放入液氮前，需经过短暂时间的低温锻炼的方法。 可分为两步冷冻法和逐级冷冻法。 该方法可以使保存材料细胞内充分脱水，避免因细胞内结冰而导致不可逆伤害的出现。;（3）冷冻贮存 适宜温度下贮存冷冻材料也很重要。 长期内贮存在液氮内的材料，需合适的液氮容器。 冷冻贮存的茎尖随保存时间的延长，其生活力可能下降。;a、快速解冻法 是指将液氮中保存的材料直接投入到37—40℃温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度为500—750℃/min，大多数植物材料可采用此种方法。;b、慢速解冻法 将液氮中保存的材料先置于0℃低温下解冻，再逐渐升至室温下进行解冻的方法。 适宜细胞含水量较低的材料，如木本植物的冬芽。;（5）再培养 指将已解冻的材料重新置于培养基上使其恢复生长的过程。 再培养是检验冷冻保存效果或确定保存方法是否合适的最根本方法。;3、影响因素 材料超低温保存时，除了预处理、冷冻、解冻方法对植物材料冷冻保存效果有重要影响外，植物材料的性质和冷冻保护剂的使用对其也有很大的影响。 ;（三）生长抑制剂保存 主要包括：高渗保存法、生长抑制剂保存法、饥饿法、矿物油覆盖法、低光照培养法及低压保存法。;作业： 1、回去复习本章书上内容。 2、细胞无性系变异含义，其机理是什么？ 3、细胞无性系变异的缺点和优点，有什么利用价值。;