酶化学概述和反应机制及工程.ppt

* * 例如磺胺药与对氨基苯甲酸具有类似的结构，而对氨基苯甲酸、二氢喋呤及谷氨酸是某些细菌合成二氢叶酸的原料，后者能转变为四氢叶酸，它是细菌合成核酸不可缺少的辅酶。由于磺胺药是二氢叶酸合成酶的竞争性抑制剂，进而减少细菌体内四氢叶酸的合成，使核酸合成障碍，导致细菌死亡。抗菌增效剂-甲氧苄氨嘧啶(TMP)能特异地抑制细菌的二氢叶酸还原为四氢叶酸，故能增强磺胺药的作用。 * * 酶的过渡态类似物是酶的一种潜在抑 制剂过渡态底物是酶与底物形成的反应活性很高的中间产物，过渡态类似物是它的结构类似物。过渡态类似物能专一性地结合在酶的活性中心位置从而对酶产生抑制作用。 过度态底物：是指底物和酶结合成中间复合物后被活化的过渡形式，它和酶的结合非常紧密。 设计过渡态底物类似物抑制剂， 因它对酶的亲合力大于酶的底物。 * * 反竞争性抑制剂必须在酶结合了底物之后才能与酶与底物的中间产物结合，该抑制剂与单独的酶不结合。 * * * * * * 酶是蛋白质，种类多，结构复杂多样，一般对酶的测定，不是直接测定其酶蛋白的浓度，而是测定其催化化学反应的能力.这是基于在最优化条件下，当底物足够（过量），在酶促反应的初始阶段，酶促反应的速度（初速度）与酶的浓度成正比（即V=K［E］）.基本原理:酶是蛋白质，种类多，结构复杂多样，一般对酶的测定，不是直接测定其酶蛋白的浓度，而是测定其催化化学反应的能力，这是基于在最优化条件下，当底物足够（过量），在酶促反应的初始阶段，酶促反应的速度（初速度）与酶的浓度成正比（即V=K［E］），故酶活力测定的是化学反应速度，一定条件下可代表酶活性分子浓度。 * * 指一类可在其它酶的作用下其结构通过共价修饰，使该酶活性发生改变，这种调节称为共价修饰调节，这类酶称为共价修饰酶(prosessing enzyme)。 指酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地非共价结合后，引起酶的构象的改变，进而改变酶的活性状态，酶的这种调节作用称为变构调节，具有变构调节的酶称变构酶。 变构剂：凡能使酶分子发生别构作用的物质称为。 变构酶多为寡聚酶，含的亚基数一般为偶数；且分子中有催化部位（结合底物）与调节部位（结合变构剂），这两部位可以在不同的亚基上，或者在同一亚基的两个不同部位。 变构酶动力学不符合米氏方程式 是指具有一种以上催化活性的酶,不同的活性中心可位于同一多肽链的不同部位,也可位于不同的亚基上. 例：ＤＮＡ聚合酶Ｉ为单一肽链的大分子蛋白质 是指非天然存在的、在人工参与下体外合成、半合成、模拟或对天然酶加以改造后形成的酶。 指具有催化活性的抗体。 ①1986年，Richard Lerrur和Peter Schaltz运用单克隆抗体技术制备了具有酶活性的抗体 ②将抗体转变为酶主要通过诱导法、引入法。 ③它同时具备抗体和酶的特征 应用蛋白质工程技术将天然酶的活性基团进行改造所得到的酶。 主要手段：通过改变酶的基因来改造酶。 化学半合成法：将催化基团与无催化功能的蛋白结合。 化学全合成法：不是蛋白质，而是一些有机物，它们通过并入酶的催化基团与控制空间的构象，从而像天然酶那样专一性地催化化学反应。 可模拟胰凝乳蛋白酶、RNase、转氨酶、碳酸酐酶等。 * * 生产高果糖浆：α-淀粉酶 加酶洗衣粉 嫩肉粉： 嫩肉粉中的蛋白酶制剂，是用木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或米曲霉蛋白酶制成的。 酶传感器：是一种生物传感器。指利用生化反应所产生的或消耗的物质的量，通过电化学装置转换成电信号，进而选择性地测定出某种成分的器件。 溶菌酶：作饲料防腐剂和杀菌剂 纤维素酶 * * 底物通过扩散作用与酶接触并发生反应。在反应结束后，产物扩散到反应介质中与酶分离。而酶则可能重复进行催化作用。这种酶在反应体系中以固相形式存在，所以称为固定化酶或固相酶。 * * 酶的生产：是指经过预先设计，并且通过人工控制而获得所需要的酶的过程。 * * * * 基因工程：是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能持续的繁殖。基因克隆（gene cloning）又称为重组ＤＮＡ技术，是应用酶学方法，在体外将不同来源的DNA分子通过酶切、连接等操作重新组装成杂合分子，并使之在适当的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代DNA分子的过程。 基因克隆（gene cloning）又称为重组ＤＮＡ技术 克隆：指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程。 * * 用基因工程技术大量生产酶。 基本过程： 分离纯化相应的酶基因。 将酶基因与载体DNA重组。 将重组DNA转移到适当的宿主细菌中。 从收集的菌体中分离纯化表达产物－－－－克隆酶。 α－淀粉酶基因的克隆、青霉素酰胺酶基因等。 2.生物酶工程（高级酶工程） 包括：克隆酶