酶的制备及活力测定.pptxVIP

第一节 酶的制备及活力测定;课程标准 1．研究酶的存在和简单制作方法。 2．尝试利用酶活力测定的一般原理和方法。 课标解读 1．了解酶的合成、作用与分布。 2．理解提取和制备酶的简单方法。 3．掌握酶活力测定的一般原理、方法及影响因素。; (1)酶的合成 酶是在生物体_______中合成的。 (2)酶的分布 多数酶在_______直接参与生物化学反应，少数的酶要分泌到_______发挥作用。 ;(3)酶的提取 提取细胞内的酶，可用_______、 _______或_______等机械将组织细胞破碎，经_____、_____制备成粗酶液；提取分泌到细胞外的酶，如___________ 、 _________等，可以直接从动物_______或细胞外的_________中提取。 (1)酶活力的表示方法 酶的活力通常以单位时间内_____________或者在单位时间内_____________来表示。 (2)测定酶活力原因 在提取过程中， _____________等多种环境条件都可能影响酶的_________，导致酶_____，直至丧失_____。 ;1．酶的分布与提取 ; 分光光度法是通过直接测定溶质对光的吸收能力来确定溶液浓度的方法。 测定过程如下： ①配制梯度浓度标准溶液； ②测出标准溶液的吸光值：在分光光度计上，选取特定的波长，测出上述各溶液的吸光值； ③绘制标准曲线：以各种标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光值为纵坐标，在方格坐标纸上绘制标准曲线； ④测定待测样品的吸光值； ⑤查找浓度，计算物质的含量：根据测出的吸光值，在标准曲线上查找它的对应浓度，计算待测物质的含量。 ; 下列各项能表示酶活性高低的是 (　　)。 A．单位时间、单位体积内反应物的总量 B．一段时间后生成物的总量 C．一段时间后，一定体积中消耗的反应物的量 D．单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增 加量 解析　酶活性的高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的反应速率表示，而酶反应速率是指单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量。 答案　D ;植物淀粉酶的制备及活力测定 (1)提取酶液：称取2 g萌发的_____种子，加1 g _______ ， 研磨成匀浆，倒入25 mL的_________中，加_______稀释 定容至25 mL，在_____下放置15～20 min，然后以3 000 r/min离心5 min，取出上清液(内含淀粉酶)。将其中一部 分上清液在_______________，使酶失活。 (2)滴加酶液：取4支试管，编号1、2、3、4。向1、2号试 管中各加入__________________1 mL；向3、4号试管中加 入_________________ 1 mL。 ;(3)恒温处理：将4支试管_____放入___℃恒温水浴锅中保温15 min，再向各试管分别加入___℃下预热的质量分数为1%的淀粉溶液2 mL，摇匀后立即放入___ ℃水浴中保温5 min。 (4)钝化处理：取出试管，向各试管同时加入4 mL 0.4 mol/L的质量浓度为0.4 mol/L __________ 4 mL，以钝化________ ___ ，使反应_____ 。 (5)测定吸光值：从4支试管中各取2 mL溶液，分别放入25 mL具塞_________中，再加入2 mL__________________试剂，混匀、煮沸、冷却后用蒸馏水稀释至25 mL混匀。分别移入4支_______，用___________在波长____ nm处进行_____，记录_______并记算平均值。 ;(6)绘制_________。 (7)查找_______含量。 (8)计算淀粉酶的活力。 ;1．酶的制备 ; (1)原理 淀粉酶活力的大小与产生的麦芽糖的量成正比。麦芽糖与3，5-二硝基水杨酸试剂反应，生成黄褐色产物。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用分光光度法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的麦芽糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。 (2)活动程序 ①提取酶液 ②滴加酶液 ③恒温处理(注意保温温度和时间) ;④钝化处理：用0.4 mol/L NaOH处理。 ⑤测定吸光值(注意加入的试剂以及呈现的颜色)。 ⑥绘制标准曲线(用分光光度计在波长520 nm处进行比色，记录吸光值，以吸光值为纵坐标、麦芽糖含量为横坐标，绘制标准曲线(其中0.0 mL管为空白对照)。 ;式中：A为淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量(在标准曲线上查得，mg)；A′为淀粉酶的对照管中的麦芽糖量(mg)；V为比色时所用样品液体积(mL)；t为酶促反应时间(min)。 特别提醒 需将提取的一部分酶液进行灭活处理，即取一部分上清液在